牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立

• 作者: 向文杰 朱远茂 李德栋 杨木娇 林俊 薛飞 陈瑞红
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: IBRV 单克隆抗体 阻断ELISA 血清学检测
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 33-39
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 字数: 5333字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201906005

摘要

为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)血清抗体的阻断ELISA方法,本研究以经蔗糖密度梯度离心法纯化的IBRV作为免疫原制备1株单克隆抗体(MAb),命名为cp-1-1.经间接ELISA、IFA和western blot鉴定,该MAb与IBRV呈阳性反应,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及牛副流感病毒3型(BPIV3)呈阴性反应,具有较强的特异性.质谱分析结果显示MAb cp-1-1识别的表位位于IBRV VP8蛋白.以纯化的IBRV作为包被抗原、MAb cp-1-1作为检测抗体,建立检测IBRV血清抗体的阻断ELISA方法.该检测方法的抗原包被量为0.89 μg/孔,样品稀释度为1∶2,检测抗体MAb量为1.3μg/孔,二抗稀释度为1∶5 000.利用50份IBRV抗体呈弱阳性的牛血清(中和抗体效价为1∶4～1∶1 6)作为标准参考血清,确定该检测方法的阻断率Cut Off值为52.06％,即阻断率高于52.06％时判为阳性,低于52.06％时判为阴性.阻断ELISA方法特异性试验显示仅IBRV阳性血清检测为阳性,而BVDV、BPIV3、牛腺病毒3型(BADV-3)和O型口蹄疫病毒(O-FMDV)阳性牛血清均检测为阴性,表明该方法具有较强的特异性;该方法可检测的最低中和抗体效价为1∶4,与病毒中和试验的敏感性一致,表明该方法具有较高的敏感性;重复性试验显示该方法批内、批间变异系数均小于10％,显示较好的重复性.对130份现地牛血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验的符合率为98.46％.用该方法对某牛场接种IBRV灭活疫苗的牛血清进行检测,抗体阳性率为99.51％(205/206).另外,采用该方法对我国8个省(市、自治区)的801份牛血清进行检测,IBRV的抗体阳性率为41.6 ％(333/801).本研究建立的阻断ELISA方法可以用于IBRV疫苗免疫监测和血清流行病学调查,为我国IBR的防控提供技术支持.