基于多反应监测质谱技术的水稻叶片蛋白绝对定量方法

• 作者: 曹珍珍 曹赵云 杨欢 程方民 陈铭学 马有宁
• 来源期刊: 中国水稻科学
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻叶片 蛋白质 多反应监测 SOD法 绝对定量
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 278-286
• 页数: 9页
• 分类号: S511.01
• 字数: 6761字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16819/j.1001-7216.2020.9056

摘要

[目的]建立水稻叶片蛋白的多反应监测(MRM)质谱绝对定量方法.[方法]水稻叶片蛋白经含1.0％十二烷基硫酸钠(SDS)的磷酸盐(PBS)缓冲液提取,丙酮沉淀除杂纯化、胰蛋白酶消化,酶解液经液相色谱分离,MRM质谱监测,外标法定量.[结果]向提取缓冲液中加入1.0％SDS可增强水稻叶片中16种靶蛋白和总蛋白质的提取效果;不同有机试剂处理,总蛋白质沉淀量存在显著差异(P<0.05),沉淀能力从强到弱依次为乙腈>丙酮>异丙醇>甲醇>乙醇;对于16种目标蛋白,总体以丙酮沉淀效果最好,其次是异丙醇和乙腈,甲醇和乙醇效果较差.该方法线性范围均达到3个数量级,定量限为0.1～2.5 nmol/L,灌浆期16种水稻叶片蛋白质含量为6.0～2818.1μg/g,相对标准偏差均小于14％.[结论]SDS可显著提高水稻叶片蛋白提取效果,采用丙酮或乙腈可获得较好的蛋白沉淀效果,但不同蛋白质略有差异.结合MRM质谱监测技术可实现水稻叶片蛋白的绝对定量,方法线性范围宽、敏度高、重复性好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈铭学	浙江大学农业与生物技术学院	43	798	16.0	27.0
3	程方民	浙江大学农业与生物技术学院	64	2304	22.0	47.0
4	曹赵云		28	426	13.0	20.0
5	杨欢		2	3	1.0	1.0
6	马有宁		7	36	4.0	6.0
9	曹珍珍		1	0	0.0	0.0