蓝氏贾第鞭毛虫和微小隐孢子虫双重荧光定量PCR两步法检测技术的建立

• 作者: 万成松 张仁利 张晓敏 李佳 牛丛 黄达娜
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 双重荧光定量PCR 蓝氏贾第鞭毛虫 微小隐孢子虫
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 32-39
• 页数: 8页
• 分类号: R382
• 字数: 5592字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.191

摘要

目的 建立同时检测蓝氏贾第鞭毛虫和微小隐孢子虫的双重荧光定量PCR两步检测方法.方法 针对蓝氏贾第鞭毛虫的gdh基因和微小隐孢子虫的cowp基因分别设计特异性引物和TaqMan探针.优化引物和探针浓度后,确定反应体系和反应条件,对其灵敏度、特异性、稳定性和重复性进行评价.通过与金标层析法进行医源性腹泻样本检测的比较评估该方法的实际应用价值.结果 该方法能特异地检测蓝氏贾第鞭毛虫和微小隐孢子虫,对其它非目标虫种均不产生扩增曲线,特异性良好.对阳性质粒pMDTM 19-T-GIA和pMDTM 19-T-CRY同时定量扩增的敏感度分别为45.1 copies/μL和52.8copies/μL;阳性质粒标准品的标准曲线在109 copies/μL～101 copies/μL之间线性关系良好(R2 =0.99),批内和批间重复实验的变异系数均小于5％.该方法与金标层析法具有较好的一致性.结论 建立的双重荧光定量PCR两步法可快速、灵敏、特异地同时检测蓝氏贾第鞭毛虫和微小隐孢子虫,具有较好的实际应用价值.