化脓隐秘杆菌间接免疫荧光方法的建立及应用

• 作者: 任绍科 何深宏 刘威 周作勇 曹立亭 李小燕 杨雪芬 程方俊
• 来源期刊: 湖南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 小鼠 化脓隐秘杆菌 高免血清 间接免疫荧光方法 特异性 灵敏度
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产
• 页码范围: 230-235
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61+2
• 字数: 4546字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13331/j.cnki.jhau.2020.02.016

摘要

通过制备兔抗化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)高免血清,筛选固定方法、封闭液、洗涤液、抗体稀释度、抗体孵育时间等应用条件,建立一种检测化脓隐秘杆菌的间接免疫荧光方法.结果表明:用冷丙酮作固定剂,10％山羊血清作封闭液,0.05％Tween-20的0.01 mol/L pH 7.4 PBS(磷酸缓冲盐溶液)作洗涤液,兔抗化脓隐秘杆菌高免血清(一抗)1:50稀释,37℃作用2 h,羊抗兔FITC(二抗)1:100稀释,37℃作用2 h,草酸铵结晶紫衬染菌体3 min,对纯培养物化脓隐秘杆菌检测,可见清晰的特异性荧光,能区分溶血隐秘杆菌、伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、猪链球菌;在人工感染化脓隐秘杆菌死亡小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及发病山羊临床病料中均能检出化脓隐秘杆菌.