缺血再灌注诱导PC12细胞发生细胞损伤的分子研究

• 作者: 任真奎 吕菊 吴昌学 禹文峰 胡玉梅 谢鹏
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 再灌注损伤 自噬 细胞损伤 活性氧 凋亡 3-甲基腺嘌呤 嗜铬神经瘤细胞
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 379-386
• 页数: 8页
• 分类号: R743.3
• 字数: 4777字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2020.04.002

摘要

目的:应用缺血再灌注高分化大鼠嗜铬神经瘤细胞(PC12)体外细胞模型研究细胞缺血再灌注损伤的分子机制.方法:PC12细胞经氧糖剥夺/复氧(OGD/R)处理体外模拟缺血再灌注,分为为对照组(Control组)、OGD 4 h后分别复氧不同时间(R0、R6、R12、R18和R24 h)作为实验组,观察各组细胞自噬和凋亡水平;以细胞自噬和凋亡水平同时最高作为药物干预的模型组,OGD/R+3-MA组细胞先进行3-甲基腺嘌呤(3-MA,2.5 Mm/L)预处理2 h后再行OGD4/R24处理作为药物干预处理组;流式细胞术检测各组(Control组、OGD4 h后复氧不同时间段组)PC12细胞的凋亡率,DCFH-DA荧光探针法检测各组(Control、OGD4 h后复氧不同时间段组)PC12细胞内活性氧(ROS)表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析各组PC12细胞自噬标志分子微管相关蛋白轻链-1A/1B(LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ)、泛素结合蛋白(P62)和自噬相关基因BECN1(Beclin-1),以及凋亡分子裂解型胱天蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)的表达变化.结果:与Control组比较,OGD4 h后复氧不同时间(R0、R6、R12、R18和R24 h)诱导了细胞凋亡和ROS水平的升高,凋亡和ROS伴随复氧时间的延长而增加(P<0.05),其中OGD4+R24组凋亡和ROS的升高最明显(P<0.05);与Control组比较,OGD4 h后复氧不同时间段(R0、R6、R12、R18和R24 h)组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比率、P62、Beclin-1和C-caspase3的表达均增加(P<0.05),其中OGD4+R24组上述自噬和凋亡相关分子的表达升高最明显(P<0.05);与OGD4+R24组比较,OGD/R+3-MA组细胞可以明显降低OGD/R诱导的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率以及Beclin-1、P62和Cleaved-caspase3的表达(P<0.05).结论:OGD/R诱导了PC12自噬性死亡,其机制可能是OGD/R导致的ROS生成过量导致自噬功能障碍,最终导致细胞自噬性死亡,加剧缺血再灌注损伤.