肝癌C/EBPγ的高表达与促进肝癌细胞增殖迁移的相关性研究

• 作者: 侯彦强 娄晓丽 王宏
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 肝癌 增殖 迁移 活性氧
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 475-481
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn114452-20190531-00329

摘要

目的 研究C/EBPγ在肝癌中的表达水平,探讨其对肝癌细胞增殖和迁移的相关性作用.方法 自2018年10月至2019年4月,在上海市松江区中心医院中心实验室,采用体外细胞实验,pLKO.1组为对照组,shg1组和shg2组为干扰组.采用Ocomine人类肿瘤芯片数据库(https://www.oncomine.org/resource/login.html)和荧光定量PCR比较分析C/EBPγ在肝癌组织及肝癌细胞株中的转录水平.肝癌细胞株HepG2和Hep3B采用DMEM(10％ FBS)、THLE-3细胞应用BEBM加生长因子37℃、5％CO2培养.构建shC/EBPγ-pLKO.1腺病毒载体,与包装载体pMD2G、pMDLG/REE和pRSV/Rev共转染293T细胞,空白载体pLKO.1作为对照,12～16h后收集病毒上清感染HepG2细胞,重复感染4次后加入嘌呤霉素(puromycin 2μg/mL)选择培养48～72 h,1μg/mL嘌呤霉素维持培养,显微镜下观察细胞状态.采用生长曲线(0、2、4和6d)检测增殖;采用无血清培养或加入抗氧化剂NAC培养0.5、1、3、6、12和24 h后,DFH-DA法检测ROS浓度,采用Real-time PCR检测氧化应激相关基因的转录水平;采用划痕实验检测细胞迁移能力.两独立样本比较采用t检验,三组以上采用单因素方差分析,两两比较采用LSD方法.结果 Oncomine数据库显示肝癌组织C/EBPγmRNA水平明显高于正常肝组织,且肝癌分级越高,其基因组中C/EBPγ DNA重复序列拷贝数越高,荧光定量PCR结果显示肝癌细胞株(HepG2和Hep3B)C/EBPγ mRNA水平明显高于正常肝细胞株(THLE-3).C/EBPγ干扰组4d(shg1: 1.93±0.70;shg2:1.28±0.40)、6 d(shg1: 3.05±0.90;shg2: 1.31±0.60)增殖显著低于对照组(4 d:6.18±0.80;6 d:22.41±2.56)(F=1 507.971,P＜0.05);营养缺乏状态下,干扰组细胞活性氧(ROS)水平与对照组相比明显升高,干扰组氧化应激相关基因(HPRT1、NQO1-tv2和NQO1-tv4)转录水平12h和24h明显升高;划痕实验显示72h干扰组(shg1:174 922.58±1 239 376.00;shg2:1 374 656.00±248 882.79)非愈合面积显著高于对照组(66 690.82±1 278 954.00)(F=39.871,P＜0.05);加入NAC后,C/EBPγ组6h细胞增殖率明显提高,0.5、1和3h细胞活性氧水平显著降低(F=7.587, 4.657,3.903,P＜0.05).结论 C/EBPγ在肝癌细胞高表达;降低C/EBPγ表达后,肝癌细胞增殖和迁移明显抑制、活性氧水平和氧化应激相关基因明显升高,提示高表达的C/EBPγ通过降低活性氧水平促进肝癌细胞的增殖和迁移.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯彦强	上海市松江区中心医院检验科	33	79	5.0	7.0
2	王宏	上海市松江区九亭医院检验科	6	36	3.0	6.0
3	娄晓丽	上海市松江区中心医院检验科	9	19	3.0	4.0