肿瘤相关巨噬细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α对乳腺癌4T1细胞上皮-间质转化及侵袭、转移能力的影响

• 作者: 倪田根 明佳 王园园 王宁 罗浩军 靳鑫
• 来源期刊: 中华乳腺病杂志(电子版)
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 巨噬细胞 转录因子 肿瘤侵润 肿瘤转移
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 78-85
• 页数: 8页
• 分类号: R737.9
• 字数: 6681字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-0807.2020.02.004

摘要

目的 探讨小鼠乳腺癌细胞(4T1)和小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)共培养构成的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中,过氧化物酶体增殖物激活受体y辅助活化因子1α(PGC-1α)促进4T1细胞侵袭的作用机制.方法 (1)提取PMs并用小发卡RNA(shRNA)敲低PGC-1α蛋白表达:采用原代细胞提取的方法提取PMs,并用低表达PGC-1α的shRNA(sh-PGC-1α-1、sh-PGC-1α-2、sh-PGC-1α-3)转染细胞,然后用Western blot检测PMs[对照组(PMs组)、阴性对照组(sh-control)、sh-PGC-1α-1组、sh-PGC-1α-2组、sh-PGC-1α-3组]中PGC-1α蛋白表达水平,选取抑制效果最好的shRNA用于实验.所得低表达PGC-1α的sh-PGC-1α PMs为本实验所需.(2)验证TAMs中PGC-1α蛋白表达水平:利用Transwell建立PMs/sh-PGC-1α PMs和4T1细胞的共培养体系,得到TAMs/sh-PGC-1α TAMs.收集细胞并提取蛋白,用Western blot检测对照组(PMs组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组PGC-1α蛋白表达水平.(3)验证共培养体系中4T1细胞的侵袭、迁移、愈合能力:利用Transwell小室模型观察对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组4T1细胞的侵袭、迁移数;利用创伤愈合实验观察对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组4T1细胞的愈合情况.(4)验证共培养体系中PMs的PGC-1α对4T1细胞发生细胞上皮-间质转化(EMT)的影响:利用Transwell建立PMs/sh-PGC-1α PMs和4T1细胞的共培养体系,采用Western blot检测对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组EMT相关蛋白E-cadherin(上皮标志物)及vimentin(间质标志物)的表达情况.多组实验数据比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法.结果 (1)对照组(PMs组)、阴性对照组、sh-PGC-1α-1组、sh-PGC-1α-2组和sh-PGC-1α-3组PGC-1α表达水平分别为1.00±0.00、0.96±0.06、0.43±0.04、0.35±0.07和0.38±0.08,5组比较,差异有统计学意义(F=32.648,P＜0.050),其中,对照组(PMs组)分别与阴性对照组、sh-PGC-1α-3组比较,PGC-1α表达水平的差异均无统计学意义(P=0.991、0.065),但是,sh-PGC-1α-1组、sh-PGC-1α-2组PGC-1α表达水平均低于对照组(PMs组)(P=0.014、0.045),并且,sh-PGC-1α-1组、sh-PGC-1α-2组和sh-PGC-1α-3组的PGC-1α表达水平均低于阴性对照组(P=0.015、0.018、0.035).因此,选择对PGC-1α抑制效果最好的sh-PGC-1α-2进行后续实验.(2)对照组(PMs组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组PGC-1α表达水平分别为1.00±0.00、1.92±0.20和0.90±0.23,3组比较,差异有统计学意义(F=10.294,P=0.011),其中TAMs组PGC-1α蛋白表达水平明显高于对照组(PMs组)和sh-PGC-1α TAMs组(P均＜0.050).(3)Transwell侵袭实验显示,对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组比较,共培养24 h后穿膜的细胞数分别为(41.67±6.01)、(75.33±5.46)和(24.33±1.45)个,3组比较,差异有统计学意义(F=29.668,P＜0.050),其中TAMs组4T1细胞的侵袭能力显著高于对照组(4T1组)和sh-PGC-1α TAMs组(P均＜0.050).Transwell迁移实验显示,对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1αTAMs组共培养24 h后穿膜的细胞数分别为(55.67±12.13)、(97.67±8.45)和(30.67±6.49)个,3组比较,差异有统计学意义(F=13.193,P＜0.05),其中TAMs组4T1细胞的迁移能力显著高于对照组(4T1组)和sh-PGC-1α TAMs组(P均＜0.050).创伤愈合实验显示,对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组4T1细胞24 h的愈合率分别为(100.00±0.00)％、(135.98±5.18)％和(68.82±7.28)％,3组比较,差异有统计学意义(F=42.435,P＜0.050),其中TAMs组4T1细胞的愈合能力显著高于对照组(4T1组)和sh-PGC-1α TAMs组(P＜0.050).(4)Western blot检测发现:对照组(4T1组)、TAMs组和sh-PGC-1αTAMs组E-cadherin表达水平分别为1.00±0.00、0.44±0.11和2.51±1.67,vimentin表达水平分别为1.00±0.00、2.20±0.15和0.36±0.10,3组比较,E-cadherin和vimentin表达水平的差异均有统计学意义(F=87.295、79.058,P均＜0.050);组间两两比较显示,TAMs组E-cadherin表达水平显著低于对照组(4T1组)和sh-PGC-1α TAMs组(P均＜0.050),vimentin表达水平显著高于对照组(4T1组)和sh-PGC-1α TAMs组(P均＜0.050),而sh-PGC-1α TAMs组E-cadherin表达水平显著高于对照组(4T1组)(P＜0.050),vimentin表达水平显著低于对照组(4T1组)(P＜0.050).结论 TAMs可促进4T1细胞的侵袭、迁移、愈合以及EMT过程,且该作用与TAMs的PGC-1α相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗浩军	重庆医科大学附属第二医院乳腺甲状腺外科	15	108	6.0	10.0
2	王宁	重庆医科大学附属第二医院乳腺甲状腺外科	17	69	5.0	7.0
3	王园园	重庆医科大学附属第二医院乳腺甲状腺外科	5	1	1.0	1.0
4	明佳	重庆医科大学附属第二医院乳腺甲状腺外科	13	41	3.0	6.0
5	倪田根	重庆医科大学附属第二医院乳腺甲状腺外科	4	3	1.0	1.0
6	靳鑫	重庆市涪陵中心医院重症医学科	1	0	0.0	0.0