Tim-3对宫颈癌细胞侵袭迁移的影响及机制研究

• 作者: 余师师 张炳兰 张秉强
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: Tim-3 宫颈癌细胞 侵袭迁移 EMT 凋亡 慢病毒
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 557-565
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2020.04.0002

摘要

该文主要研究慢病毒介导的T细胞免疫球蛋白黏液素3(T-cell immunoglobulin mucin-3,Tim-3)对宫颈癌细胞的促肿瘤作用及其相关作用机制.首先,采用PCR方法获取Tim-3片段,将其克隆入pCDH载体中,并通过酶切和测序进行鉴定;将三个表达载体,即重组阳性表达载体(pCDH-Tim-3)、空载体(pCDH-NC)和绿色荧光蛋白载体(pCDH-GFP),分别与psPAX2和pMD2.G共转染至293T细胞中,从而形成相应的慢病毒组.然后,将三组慢病毒分别感染HeLa细胞,获得稳定细胞株(HeLa-Tim-3、HeLa-NC、HeLa-GFP),其中设置HeLa-NC为空载病毒阴性对照组;最后,通过观察HeLa-GFP组,初步获取慢病毒感染效率;运用流式细胞术、Western blot和细胞免疫荧光检测Tim-3的相对表达水平;细胞划痕和Transwell检测细胞的迁移及侵袭能力;Westem blot检测上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Snail)的表达变化;流式细胞术检测细胞凋亡率变化.该文成功构建了pCDH-Tim-3慢病毒表达载体并将其包装成慢病毒,获得对应的稳定细胞株;在HeLa-GFP中可以观察到大量的绿色荧光;与HeLa-NC组相比,Western blot、流式细胞术和细胞免疫荧光检测结果均表明,HeLa-Tim-3组的Tim-3蛋白表达水平显著升高(P＜0.05);细胞划痕实验和Transwell检测结果均表明,HeLa-Tim-3组的迁移侵袭能力明显提高(P＜0.01);另外,Western blot检测结果表明,与HeLa-NC组相比,HeLa-Tim-3组N-cadherin和Snail显著增多但E-cadherin明显减少(P＜0.05),而流式细胞术检测结果表明,HeLa-Tim-3组凋亡率显著减少(P＜0.001).因此,高表达Tim-3宫颈癌细胞可以通过EMT转化和抑制细胞凋亡等相关作用机制来加强肿瘤的恶性进展.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张秉强		38	295	9.0	16.0
2	余师师		4	1	1.0	1.0
3	张炳兰		1	0	0.0	0.0