BDNF通过Akt信号通路减轻罗哌卡因诱导的神经细胞损伤

• 作者: 刘向勇 刘晶影 朱于临
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 关键词: 脑源性神经营养因子 罗哌卡因 蛋白激酶B 神经细胞
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 154-163
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2020.02.008

摘要

目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对罗哌卡因诱导的神经细胞损伤的保护作用及其机制. 方法 (1)实验一:分别用0、1、2、3、4、5 mmol/L罗哌卡因刺激入神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 48h,于显微镜下观察各组细胞的形态变化,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性情况,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,采用免疫组化染色检测各组细胞中蛋白激酶B(Akt)、增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞的表达.(2)实验二:分别用0、1、3、5、7 mmol/L罗哌卡因刺激SH-SY5Y细胞48 h,采用MTT法检测各组细胞的活性情况并计算出罗哌卡因的半抑制浓度(IC50).将SH-SY5Y细胞分为对照组(磷酸盐缓冲液刺激48 h)、罗哌卡因组(IC50浓度罗哌卡因刺激48 h)、BDNF+罗哌卡因组(20 μg/L BDNF刺激2 h+IC50浓度罗哌卡因刺激48 h)、Akt信号通路激活剂SC79+罗哌卡因组(5mg/LSC79刺激2h+ICs0浓度罗哌卡因刺激48 h)、BDNF+Akt信号通路抑制剂API-2+罗哌卡因组(20 μg/L BDNF及10 μmol/L API-2刺激2 h+IC50浓度罗哌卡因刺激48 h),于显微镜下观察各组细胞的形态变化,采用MTT法检测各组细胞的活性情况,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,采用免疫组化染色检测各组细胞中Akt、PCNA阳性细胞的表达,采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3) mRNA及蛋白的表达,采用Western blotting检测各组细胞中Akt、磷脂酰肌醇3-激酶(PDK)蛋白的表达. 结果 (1)实验一:与0mmol/L罗哌卡因组比较,l、2、3、4、5 mmol/L罗哌卡因组的细胞活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,Akt、PCNA阳性细胞数明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)实验二:与对照组比较,罗哌卡因组的细胞活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,Akt、PCNA阳性细胞数明显降低,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达均明显降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达均明显升高,p-Akt、p-PDK蛋白的表达均明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与罗哌卡因组比较,BDNF+罗哌卡因组、SC79+罗哌卡因组的细胞活性明显升高,细胞凋亡率明显降低,Akt、PCNA阳性细胞数明显升高,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达明显降低,p-Akt、p-PI3K蛋白的表达明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与BDNF+罗哌卡因组、SC79+罗哌卡因组比较,BDNF+API-2+罗哌卡因组的细胞活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,Akt、PCNA阳性细胞数明显降低,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达明显升高,p-Akt、p-PI3K蛋白的表达明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 BDNF可通过激活Akt信号通路减轻罗哌卡因引起的神经细胞损伤,从而调节神经细胞的增殖和凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘向勇	滨州医学院药学院	23	60	5.0	6.0
2	刘晶影	烟台山医院产科	3	17	2.0	3.0
3	朱于临	烟台山医院麻醉科	1	0	0.0	0.0