KIF1A过表达对氧糖剥夺-再灌注损伤PC12细胞的作用机制研究

• 作者: 张辉 徐汪洋 林想红 王业杨 黄丽珊
• 来源期刊: 中国脊柱脊髓杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Kinesin-3家族成员蛋白1A PC12细胞 氧糖剥夺 凋亡 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 365-371
• 页数: 7页
• 分类号: Q256
• 字数: 5157字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-406X.2020.04.12

摘要

目的:研究Kinesin-3家族成员蛋白(Kinesin-3 family member1A,KIF1A)对氧糖剥夺-再灌注诱导的PC12细胞活力、自噬和凋亡的影响,为进一步研究KIF1A在脊髓缺血再灌注损伤治疗方面提供理论依据.方法:PC12细胞(美国ATCC公司)分为四组:A组,对照组,无处理;B组,氧糖剥夺再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)组,PC12细胞用无糖DMEM培养基,于含混合气体(95％N2和5％ C02)的37℃恒温箱内密闭缺氧培养4h;C组,pcDNA3.1空质粒组,PC12细胞转染peDNA3.1空质粒48h,进行OGD/R处理;D组,pcDNA3.1-KIF1A质粒组,PC12细胞转染pcDNA3.1-KIF1A质粒48h,进行OGD/R处理.B、C、D组经OGD/R处理后,更换常规培养基,正常孵育24h,收集细胞总RNA及蛋白质,进行实时定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT PCR)和Western blot检测KIF1A mRNA和蛋白的表达情况;CCK8检测细胞存活率变化;凋亡ELISA及Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞凋亡及Caspase-3活性;Western blot检测各组自噬相关基因LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的蛋白表达变化.结果:与A组(1.00±0.00)相比,B组细胞KIF1A mRNA (0.41±0.05)和蛋白表达水平(0.52±0.07,P＜0.05)显著下调;细胞活力[(51.60±7.35)％,P＜0.051显著降低.与B组(1.00±0.00)相比,C组空质粒对KIF1AmRNA(0.91±0.13)及蛋白质(1.08±0.08)表达,细胞活力[(51.60±7.35)％ vs (47.30±4.16)％],细胞凋亡(1.95±0.18 vs 2.08±0.16,P＞0.05)等无显著影响.而D组KIF1A过表达后能显著上调KIF1A mRNA(2.63±0.16)以及蛋白表达(2.51±0.18,P＜0.05),显著缓解OGD/R引起的细胞存活率下降[(51.60±7.35)％vs(86.40±9.03)％]及凋亡[1.95±0.18 vs 1.36±0.12,P＜0.05];与B组相比,D组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(1.68±0.14 vs1.19±0.09,P＜0.05)及pmTOR的表达(1.00±0.00 vs 1.26±0.02,p＜0.05)显著受抑制,P62表达显著升高(0.53±0.05 vs 0.89±0.09,P＜0.05).结论:KIF 1A过表达可促进缺血再灌注损伤诱导的PC12细胞存活、抑制细胞自噬与凋亡,其机制可能与抑制mTOR通路相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐汪洋	广东省第二人民医院骨科中心	36	175	8.0	11.0
2	黄丽珊	广东省第二人民医院骨科中心	12	38	5.0	5.0
3	张辉	广东省第二人民医院骨科中心	7	4	2.0	2.0
4	林想红	广东省第二人民医院骨科中心	1	0	0.0	0.0
5	王业杨	广东省第二人民医院骨科中心	3	0	0.0	0.0