大肠杆菌cpxR和hns双基因缺失株的构建

• 作者: 吴华 孙亚伟 孙华润 李文娅 胡功政 胡慧慧 苑丽 邝启红
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: H-NS λ-Red同源重组 双基因缺失 pKD46质粒 CpxAR
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 116-121
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.01.20

摘要

为构建调节蛋白H-NS及双组分信号转导系统CpxAR的单、双基因缺失株,本研究以大肠杆菌ATCC25922为研究对象,以pKD4质粒为模板,分别扩增出含kanr基因的线性打靶片段,在pKD46质粒的辅助及L-阿拉伯糖的诱导下进行Red同源重组,使线性打靶片段替换大肠杆菌ATCC25922中的cpxR、hns基因,再用pCP20质粒消除FRT位点间的kanr基因,构建单基因缺失株△cpxR和△hns.接着以△cpxR为研究对象,用同样方法敲除hns基因,构建双基因缺失株△cpxR△hns.最后将重组表达质粒cpxR-pBAD/HisA、hns-pBAD/HisA电转入上述3种缺失株中,制备回补菌株△cpxR /pcpxR、△hns/phns、△cpxR△hns/pcpxR和△cpxR△hns/phns.结果 表明,利用该重组系统成功敲除了大肠杆菌ATCC25922中cpxR、hns基因,构建了单、双基因缺失株△cpxR、△hns和△cpxR△hns以及它们的回补菌株,为研究H-NS及CpxAR互作调控IncFⅡ质粒接合作用的分子机制提供了有力的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苑丽	河南农业大学牧医工程学院	96	702	15.0	22.0
2	胡功政	河南农业大学牧医工程学院	150	1300	20.0	29.0
3	吴华	河南农业大学牧医工程学院	67	302	10.0	13.0
4	孙华润	河南农业大学牧医工程学院	4	1	1.0	1.0
5	胡慧慧	河南农业大学牧医工程学院	1	0	0.0	0.0
6	孙亚伟	河南科技学院动物科技学院	24	36	4.0	4.0
7	李文娅	河南农业大学牧医工程学院	1	0	0.0	0.0
8	邝启红	河南农业大学牧医工程学院	1	0	0.0	0.0