miR-140-5p靶向转化生长因子ββ受体Ⅰ调控乳小鼠心肌成纤维细胞的胶原表达

• 作者: 孟祥雯 张毅 张飞雪 许丹丹
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 糖尿病 心肌纤维化 微RNA 转化生长因子β Smad蛋白 信号通路
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 729-735
• 页数: 7页
• 分类号: R966
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2020.10.002

摘要

目的 探究微RNA-140-5p(miR-140-5p)对转化生长因子(TGF)β受体Ⅰ(TβRⅠ)的靶向调控作用和机制.方法 ①乳小鼠心肌成纤维细胞(MCF)给予高浓度葡萄糖(HG)30 mmol·L-1或TGF-β15μg·L-1处理24 h后,荧光定量PCR法检测miR-140-5p mRNA表达.②HEK293T细胞分为细胞对照组、转染miR-140-5p模拟物(mimics)30 nmol·L-1组、转染含miR-140-5p结合位点的野生型TβRⅠ3'UTR序列双荧光素酶载体(WT)1 ng·L-1组、突变型双荧光素酶载体(MT)1 ng·L-1组、WT 1 ng·L-1+miR-140-5p mimics 30 nmol·L-1组和MT 1 ng·L-1+miR-140-5p mimics 30 nmol·L-1组,48 h后采用化学发光法检测萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶活性.③ 对MCF转染miR-140-5p mimics 24 h后,给予HG 30 mmol·L-1或TGF-β15μg·L-1处理24 h,Western印迹法检测转染MCF中TβRⅠ,p-Smad2,Smad7,Ⅰ型胶原蛋白(CollⅠ)和CollⅢ蛋白表达水平.结果 ①与细胞对照组比,HG 30 mmol·L-1和TGF-β15μg·L-1组MCF中miR-140-5p表达显著降低(P<0.05).② 双荧光素酶报告基因实验结果 显示,与细胞对照组相比,HEK293T细胞转染miR-140-5p mimics组和WT组荧光活性显著降低(P<0.05),与WT组相比,WT+miR-140-5p mimics荧光活性显著降低(P<0.05),与miR-140-5p mimics组相比,miR-140-5p mimics+WT组荧光活性显著降低,而miR-140-5p mimics+MT组荧光活性显著升高(P<0.05).③与细胞对照组相比,转染miR-140-5p mimics组TβRⅠ,CollⅠ和CollⅢ蛋白表达水平及Smad2磷酸化水平显著降低(P<0.05),Smad7蛋白表达增加(P<0.05);与miR-140-5p mimics组相比,miR-140-5p mimics+HG 30 mmol·L-1和miR-140-5p mimics+TGF-β15μg·L-1组TβRⅠ,CollⅠ和CollⅢ蛋白表达及Smad2磷酸化水平显著升高(P<0.05),Smad7蛋白表达显著降低(P<0.05).结论 miR-140-5p能靶向TβRⅠ并通过TGF-β/Smad信号通路调控HG及TGF-β1诱导的MCF胶原表达.