摘要:
目的 探究miR-382-5p过表达对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响.方法 将miR-382-5p mimic转染入U251细胞,逆转录-聚合酶链反应检测miR-382-5p、磷酸酶-张力蛋白同源物(PTEN)mRNA水平;生物信息学预测miR-382-5p与PTEN存在碱基结合位点,构建PTEN pcDNA载体过表达,荧光素酶报告实验检测miR-382-5p与PTEN靶向关系,将细胞随机分为4组:Control组、mimics组、pc-PTEN组和mimics+pc-PTEN组进行后续实验,逆转录-聚合酶链反应检测各组细胞PTEN水平;克隆形成法检测细胞增殖;逆转录-聚合酶链反应检测Ki67、Survivin、c-Myc mRNA水平;Transwell检测细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平.结果 miR-382-5p和PTEN存在直接靶向作用关系,与Control组相比较,mimics组miR-382-5p mRNA水平升高(P<0.05),PTEN mRNA水平降低(P<0.05),细胞克隆形成率降低(P<0.05),Ki67、Survivin mRNA水平降低(P<0.05),c-Myc mRNA水平升高(P<0.05),细胞侵袭数降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低(P<0.05).pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平降低(P<0.05),PTEN mRNA水平升高(P<0.05),细胞克隆形成率升高(P<0.05),Ki67、Survivin mRNA水平升高(P<0.05),c-Myc mRNA水平降低(P<0.05),细胞侵袭数升高(P<0.05),E-cadherin蛋白水平降低(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白水平升高(P<0.05);与pc-PTEN组相比较,mimics+pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平升高(P<0.05),PTEN mRNA水平降低(P<0.05),细胞克隆形成率降低(P<0.05),Ki67、Survivin mRNA水平降低(P<0.05),c-Myc mRNA水平升高(P<0.05),细胞侵袭数降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低(P<0.05).结论 miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调可抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、生长和上皮细胞-间充质转化.