CFSE标记法分析番鸭呼肠孤病毒感染对番鸭回肠淋巴细胞归巢的影响

• 作者: 严萍 刘珍妮 吴异健 吴春琳 廖吕燕 朱正 李健 李明慧 黄一帆
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯 番鸭 淋巴细胞 流式细胞术 归巢
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 159-169
• 页数: 11页
• 分类号: S852.4
• 字数: 7287字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.01.018

摘要

旨在建立一种可靠的体外活番鸭淋巴细胞的荧光标记方法,并用于分析番鸭呼肠孤病毒感染对雏番鸭回肠淋巴细胞归巢的影响.选择活细胞荧光染剂5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE,CFSE)对分离的番鸭淋巴细胞进行标记和利用流式细胞术对体外标记的淋巴细胞体内示踪检测分析,并利用该方法对MDRV感染雏番鸭回肠组织的淋巴细胞数量进行流式细胞术和石蜡切片免疫荧光检测分析;结果最终确定CFSE体外标记番鸭淋巴细胞的条件为以PBS为孵育液,终浓度10 μmol·L-1,37℃30 min;试验结果表明番鸭外周血内的CFSE+淋巴细胞率基本稳定在2％～5％,CFSE+淋巴细胞峰值出现顺序依次为脾、空肠、回肠、盲肠、十二指肠、法氏囊和胸腺;此外,感染MDRV后1～10 d MDRV组中CFSE+淋巴细胞率极显著(P＜0.01)高于MOCK组,该结果与α4+淋巴细胞率和石蜡切片免疫荧光检测结果一致.结果 表明本试验CFSE标记的淋巴细胞可用于体内淋巴细胞示踪,初步应用结果提示MDRV感染促进番鸭淋巴细胞向回肠归巢,为进一步阐明MDRV感染的肠道组织致病机制奠定了基础.