冷冻原肠中细菌基因组DNA提取方法的建立

• 作者: 仇保丰 刘文斌 刘春 宋鸿雁 朱顺星 邵义祥 高雪梅
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 冷冻原肠 细菌 细菌基因组DNA 提取方法
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 87-93
• 页数: 7页
• 分类号: S852.61
• 字数: 5380字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.02.019

摘要

为建立冷冻原肠中细菌基因组DNA的直接提取法,采用震荡洗脱、金属网过滤和梯度离心相结合的方法,对2份冷冻原肠样品进行前处理;对经前处理后的原肠样品,采用酚/氯仿法提取细菌基因组DNA,然后进行琼脂糖电泳和OD260/OD280比值测定;以细菌基因组DNA为模板,用PCR技术扩增细菌16S rDNA并构建克隆文库,并从2个文库中各随机挑取3个菌落进行16S rDNA的PCR鉴定和DNA测序.结果显示:样品提取的DNA浓度、纯度较高,OD260/OD280比值介于1.8～2.0;挑取的6个菌落中,1个为阴性,剩余5个为阳性,为肠球菌属(Enterococcus)和魏斯氏菌属(Weissella)的5种细菌.结果表明,本研究提取的原肠细菌基因组DNA质量较好,可用于非培养法研究冷冻原肠中细菌的多样性.本研究解决了因缺乏原肠细菌基因组DNA提取方法,无法进一步应用现代分子生物学方法研究冷冻原肠细菌的多样性、菌群组成结构和动态变化等难题.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘春	南通大学实验动物中心	51	271	8.0	14.0
2	宋鸿雁	南通大学实验动物中心	24	127	6.0	11.0
3	邵义祥	南通大学实验动物中心	71	341	11.0	15.0
4	朱顺星	南通大学实验动物中心	29	99	6.0	8.0