MicroRNA-26b抑制胚胎干细胞的多能性

• 作者: 刘小燕 吴繁荣 孟祥云 曹靓 李天立 王康林 王浩浩 臧洪梅 金瑞
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: miR-26b 胚胎干细胞 多能性 分化
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 997-1001
• 页数: 5页
• 分类号: R945
• 字数: 3428字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.07.003

摘要

目的 明确miRNA-26b(miR-26b)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)多能性的调控作用.方法 实时荧光定量PCR检测miR-26簇前体在mESCs和小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中的表达.实时荧光定量PCR检测胚状体(EB)形成过程中成熟miR-26b的表达.CCK-8方法检测miR-26b对mESCs增殖能力的影响.流式细胞术测定miR-26b对mESCs细胞周期与凋亡的影响.使用碱性磷酸酶染色试剂盒检测miR-26b对mESCs中碱性磷酸酶活性的影响.实时荧光定量PCR检测miR-26b对mESCs中多能性转录因子(Oct4、Sox2和Nanog)mRNA表达的影响.使用蛋白质印迹法检测miR-26b对mESCs中3个关键转录因子的蛋白表达影响.用体外模型观察转染pcDNA-pre-miR-26b对mESCs形态的影响.结果 mESCs中,miR-26b的前体在miR-26簇群表达最高.MEF中所有miR-26前体均上调,其中pre-miR-26b上调幅度最大(上调约10倍).成熟的miR-26b在EB形成过程中从第2天到第6天明显上调,并且成熟miR-26b在MEF中的表达水平明显高于其在mESCs中的表达水平.miR-26b的过表达抑制mESCs增殖,并显示miR-26b过表达诱导mESCs于细胞周期的G1期阻滞,miR-26b不影响mESCs的凋亡.ALP染色结果表明miR-26b导致mESCs中ALP活性降低.过表达miR-26b导致mESCs中多能性标志物(Oct4、Sox2和Nanog)的表达水平降低.体外模型研究miR-26b对mESCs分化的影响,在miR-26b诱导的第4天观察到了分化的细胞.结论 此研究证实miR-26b对mESCs多能性的调控作用.