摘要:
本试验利用体内试验和体外试验研究壳聚糖(CHI)对泌乳中期奶牛一氧化氮(NO)免疫调节途径的影响.体内试验:按产奶量、泌乳期、胎次和体重相近的原则,将40头泌乳中期荷斯坦奶牛随机分为5个处理,每个处理8个重复,每个重复1头牛.各处理分别在基础饲粮中添加0、500、1000、1500和2000 mg/kg的CHI.试验期60 d,其中1~30 d为前期,31~60 d为后期.试验期间奶牛自由采食和饮水.体外试验:分为2个子试验,每个试验均采用2×2×2三因子设计,即2个脂多糖(LPS)添加水平(0和10μg/mL)×2个壳寡糖(COS)添加水平(0和160μg/mL)×2个抑制剂添加水平(添加和不添加),共8个处理,每个处理6个重复.2个子试验的抑制剂分别是诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂1400W(添加水平1 mmol/L)和核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂PDTC(添加水平10 mmol/L).体内试验结果表明:在试验第60天,血清中NO含量随CHI添加水平增加呈极显著的一次线性(P<0.01)或二次曲线(P<0.01)升高效应,iNOS活性呈趋于显著的一次线性(0.05≤P<0.10)或显著的二次曲线(P<0.05)升高效应;外周血单个核细胞(PBMCs)中iNOS和NF-κB基因表达量均呈趋于显著的一次线性(0.05≤P<0.10)或显著的二次曲线(P<0.05)升高效应;上述指标在1500 mg/kg添加水平表现为最高.体外试验结果表明:1)当1400W作为抑制剂,COS显著增加iNOS基因表达量(P<0.05);1400W极显著降低NO含量和iNOS活性(P<0.01).2)当PDTC作为抑制剂,PDTC显著降低NO含量(P<0.05),极显著降低iNOS和NF-κB的基因表达量(P<0.01).3)在脂多糖(LPS)刺激的条件下,NO含量、iNOS活性和iNOS基因表达量均极显著增加(P<0.01),而对NF-κB基因表达量无显著影响(P>0.05);而添加COS又能够缓解LPS引起的NO含量、iNOS活性和iNOS基因表达量的升高.上述结果提示,COS可通过增加iNOS和NF-κB的基因表达量,升高iNOS的活性,从而增加机体内NO的产生,对奶牛免疫功能起到调节作用,而且这种作用呈现剂量依赖效应.此外,COS引起的PBMCs中NO含量的升高,是通过增加iNOS和NF-κB的基因表达量,提高iNOS活性来完成的,且COS对奶牛PBMCs中NO途径的相关指标具有双向调节作用.综上所述,CHI可通过NO分子途径发挥免疫调节功能,且添加水平为1500 mg/kg时效果最佳.