小鼠及猕猴胚胎MECP2基因T158M单碱基突变体系的建立

• 作者: 周勤 张婷 李善刚 王爽 陈永昌
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Rett综合征 单碱基编辑 非人灵长类 编辑效率
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 31-39
• 页数: 9页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.2001063

摘要

目的:利用单碱基编辑技术定点修饰MECP2基因T158M位点,获得单一定点突变类型的啮齿类及非人灵长类胚胎,为建立模拟临床上Rett综合征的疾病动物模型奠定基础.方法:利用单碱基编辑技术构建3对T158 M-sgRNA质粒,并分别与BE系统(BE3或BF4max)质粒共转染293T细胞筛选高效的sgRNA,通过显微注射将体外转录的mRNA以不同的浓度组合注射到ICR小鼠和猕猴受精卵中,检测小鼠和猕猴胚胎发育率和编辑效率,评估BE3和BE4max的工作效率及最优浓度组合.结果:小鼠胚胎上BE4max(ng/μl)∶sgRNA (ng/μ1)=100∶50浓度组合时,小鼠胚胎发育率和编辑效率最佳,同时该浓度组合在猕猴胚胎上也获得了有效编辑效率.结论:成功在小鼠及猕猴胚胎上实现了MECP2基因T158M位点上C→T的转变,为后期建立T158M突变的RTT动物模型建立了稳定的胚胎编辑体系.