鸡胚原代软骨细胞的分离培养及表型鉴定

• 作者: 刘宗平 卞建春 周佳桦 张松彬 张雨蓓 李赛慧 袁燕 顾建红
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡胚原代软骨细胞 骨架染色 阿利新蓝 Ⅱ型胶原 基质金属蛋白酶13
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 349-354
• 页数: 6页
• 分类号: S852.1|S856.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.02.22

摘要

选取不同日龄的SPF鸡胚进行骨架染色,确定软骨最佳取材日龄为15日龄,分离关节软骨,采用胰蛋白酶和Ⅳ型胶原酶两步消化法获取软骨细胞.CCK-8法检测细胞增殖率,阿利新蓝染色及实时荧光定量PCR技术检测软骨细胞标志性基因表达来鉴定分离培养的软骨细胞.结果 显示,分离培养的软骨细胞3～5 d时增殖较快,阿利新蓝染色阳性,能够表达sox9、colⅡ、acan、vegfA和mmp13等不同分化阶段标志性基因,且随着体外培养时间的增加,晚期表达基因vegfA和mmp13 mRNA表达上调.结果 表明,分离培养的鸡胚软骨细胞具有软骨细胞表型,可作为家禽骨骼及钙磷代谢紊乱性疾病研究模型.本试验旨在建立鸡胚原代软骨细胞的体外培养体系,以期为家禽骨骼及钙磷代谢紊乱性疾病研究提供理论依据.