细叶百合LpPEX5基因克隆及蛋白表达纯化

• 作者: 徐阳 何好 朱国庆 陈诗雅 金淑梅
• 来源期刊: 生物技术
• 关键词: 细叶百合 过氧化物酶体生物合成蛋白 蛋白表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 论著|Research Paper
• 页码范围: 417-423,448
• 页数: 8页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2020.05.0066

摘要

[目的]探究LpPEX5蛋白表达与纯化的最佳条件.[方法]从细叶百合的鳞茎中克隆出过氧化物酶体生物合成蛋白基因(LpPEX5),在详细分析该蛋白质同源氨基酸序列比对、进化树、保守区域,二级结构与三级结构预测等生物信息学后,构建到pQE-30原核表达载体上,转化大肠杆菌M15,通过SDS-PAGE凝胶电泳对不同诱导时间、诱导温度、IPTG浓度影响蛋白的表达量进行研究.利用亲核层析树脂纯化获得融合蛋白.[结果]成功克隆出LpPEX5基因,构建pQE-LpPEX5原核表达载体并且诱导和纯化出LpPEX5蛋白.[结论]LpPEX5蛋白的最佳诱导条件为30℃,1 mmol/L IPTG诱导5h.该研究为分析LpPEX5蛋白的活性、验证蛋白间的相互作用等后续试验研究奠定了基础.