半枝莲总黄酮调控RIP1/RIP3通路减轻急性脑梗死缺血再灌注大鼠大脑皮层神经元的损伤

• 作者: 刘雯 姚袁媛 张立波 王清勇
• 来源期刊: 中医学报
• 学科: 医学
• 关键词: 半枝莲总黄酮 急性脑梗死缺血再灌注 受体相互作用蛋白激酶 神经元损伤 大鼠
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1476-1484
• 页数: 9页
• 分类号: R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16368/j.issn.1674-8999.2020.07.331

摘要

目的:分析半枝莲总黄酮通过调控受体相互作用蛋白激酶-1(receptor interaction protein kinase-1,RIP1)/受体相互作用蛋白激酶-3(receptor interaction protein kinase-3,RIP3)通路减轻急性脑梗死缺血再灌注大鼠大脑皮层神经元损伤的机制.方法:从48只SPF级SD大鼠中随机挑出40只建立大鼠中脑动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,剩余8只记为阴性对照组.将MCAO建模成功的大鼠随机分为模型组,阳性对照组,半枝莲总黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组.阳性对照组以30 mg·kg-1尼莫地平溶于2 mL生理盐水中灌胃;半枝莲总黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组分别使用200 mg·kg-1、100 mg·kg-1、50 mg·kg-1半枝莲总黄酮溶于2 mL生理盐水中灌胃;模型组和阴性对照组使用2 mL生理盐水灌胃,每天1次,连续给药10d.给药前后分别使用Longa评分标准对大鼠神经功能进行评分;治疗前后分别通过酶联免疫吸附实验检测血清白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-6水平.断头法处死大鼠后,取模型大鼠大脑皮层梗死部位组织和阴性对照组大鼠大脑皮层相同部位组织,通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法观察大脑皮层神经细胞凋亡情况;采用HE染色观察大脑皮层组织病理变化;使用RT-qPCR检测大脑皮层组织中RIP1、RIP3和MLKL mRNA相对表达量;通过蛋白免疫印记法检测大脑皮层组织RIP1、RIP3和MLKL蛋白表达量及p-RIP1、p-RIP3、p-MLKL水平.结果:神经功能评分比较显示:模型组,阳性对照组和半枝莲总黄酮不同剂量组均低于治疗前(P＜0.05).给药后,模型组高于阴性对照组(P＜0.05),阳性对照组和半枝莲总黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组低于模型组(P＜0.05),半枝莲总黄酮高剂量组和中剂量组低于阳性对照组和半枝莲总黄酮低剂量组(P＜0.05),半枝莲总黄酮高剂量组低于半枝莲总黄酮中剂量组(P＜0.05).大鼠血清中IL-1 β、TNF-α和IL-6水平显示:模型组给药后以上指标高于给药前(P＜0.05),阳性对照组和半枝莲总黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组给药后均低于给药前(P＜0.05);给药后,模型组高于阴性对照组(P＜0.05),阳性对照组和半枝莲总黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组低于模型组(P＜0.05),半枝莲总黄酮高剂量和中剂量组低于阳性对照组和半枝莲总黄酮低剂量组(P＜0.05),半枝莲总黄酮高剂量组低于半枝莲总黄酮中剂量组(P＜0.05).脑神经细胞凋亡TUNEL染色结果显示:阳性对照组和半枝莲总黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组均低于模型组(P＜0.05),半枝莲总黄酮高剂量组、中剂量组均低于阳性对照组和半枝莲总黄酮低剂量组(P＜0.05),半枝莲总黄酮高剂量组低于半枝莲总黄酮中剂量组(P＜0.05).HE染色结果显示:模型组大脑皮层组织出现严重水肿,空泡样变,阳性对照组和半枝莲总黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组均减轻,其中半枝莲总黄酮高剂量组病变程度最轻;RIP1、RIP3和MLKL蛋白表达量各组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).RIP1、RIP3和MLKL mRNA相对表达量和p-RIP1、p-RIP3、p-MLKL水平结果显示:阳性对照组和半枝莲总黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组均低于模型组(P＜0.05),半枝莲总黄酮高剂量组和中剂量组低于阳性对照组和半枝莲总黄酮低剂量组(P＜0.05),半枝莲总黄酮高剂量组低于半枝莲总黄酮中剂量组(P＜0.05).结论:半枝莲总黄酮能降低急性脑梗死缺血再灌注大鼠大脑皮层神经功能损伤,减轻炎性反应,减轻神经元损伤,推测其作用机制与下调RIP1、RIP3和MLKL mRNA表达,降低p-RIP1、p-RIP3、p-MLKL水平,抑制RIP1/RIP3通路对细胞程序性凋亡的调控有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王清勇		3	0	0.0	0.0
2	张立波		12	24	4.0	4.0
3	刘雯		3	4	1.0	2.0
4	姚袁媛		1	0	0.0	0.0