β淀粉样蛋白1-42寡聚体对人诱导性多能干细胞源性小胶质细胞炎症和氧化应激反应的影响

• 作者: 任巧 张林 刘小慧 蒋宁 周文霞
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 人诱导性多能干细胞 小胶质细胞 β淀粉样蛋白
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 817-824
• 页数: 8页
• 分类号: R964
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2020.11.003

摘要

目的 研究β淀粉样蛋白1-42寡聚体(oAβ)对认知正常老年人(CNC)及晚期散发性阿尔茨海默病(AD)患者诱导性多能干细胞(hiPSC)源性的小胶质细胞(hiMGL)炎症及氧化应激反应的影响.方法 按照本实验室前期建立的hiPSC向hiMGL诱导分化的方法,首先将CNC和AD患者来源的hiPSC诱导分化为造血祖细胞(hiHPC),用流式细胞术检测其表达hiHPC标志物CD34和CD43的阳性率;进而将hiHPC诱导分化为小胶质细胞(简称CNC hiMGL和AD hiMGL),用免疫荧光法检测其表达离子钙接头蛋白分子1(IBA1)和跨膜蛋白119(TMEM119)的阳性率.用oAβ1μmol·L-1孵育hiMGL 24 h后,用CCK-8法检测hiMGL细胞存活,中性红实验检测细胞吞噬功能,荧光探针法检测hiMGL细胞内活性氧(ROS)水平,Luminex技术检测hiMGL培养上清细胞因子〔白细胞介素(IL)-10,IL-1β,IL-6,肿瘤坏死因子α,CC趋化因子配体7和CXC趋化因子配体10〕水平.以oAβ1μmol·L-1孵育hiMGL 1.5 h,分别于终止孵育后0,3,6和9 h将细胞裂解,ELISA检测细胞内oAβ剩余含量.结果 CNC hiHPC和AD hiHPC表达CD34和CD43,且阳性率均>90％;CNC hiMGL和AD hiMGL表达IBA1和TMEM119,且阳性率均>90％.oAβ1μmol·L-1孵育24 h后,oAβ组CNC hiMGL和AD hiMGL组细胞存活、吞噬能力、上述细胞因子分泌水平和ROS水平均显著高于各自对照组(P<0.01),且oAβ组AD hiMGL上述指标均显著高于同组CNC hiMGL(P<0.01).hiMGL终止孵育oAβ后0 h,AD hiMGL内oAβ摄入含量高于CNC hiMGL(P<0.01);终止孵育后0～9 h,oAβ含量在CNC hiMGL内下降较快,9 h时AD hiMGL内oAβ剩余含量显著高于CNC hiMGL(P<0.01).结论 本研究诱导分化的CNC hiMGL和AD hiMGL 90％以上表达小胶质细胞特异性标志蛋白IBA1和TMEM119,且二者无明显差异.oAβ刺激后,AD hiMGL和CNC hiMGL均出现了炎症反应和氧化应激反应,前者反应更强,而降解oAβ的能力较弱.