胃肠安诱导胃癌MKN45细胞自噬的机制

• 作者: 徐燕 李佳 李朝燕 秦梦梦 赵爱光 陈伟霞
• 来源期刊: 中国实验方剂学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 健脾 胃肠安 胃癌 自噬 MKN45细胞
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 药理
• 页码范围: 71-77
• 页数: 7页
• 分类号: R22|R242|R2-031|R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20192323

摘要

目的:观察健脾复方胃肠安对人胃癌MKN45细胞自噬的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制.方法:体外培养人胃癌MKN45细胞,采用细胞活力检测法(CCK-8)检测不同质量浓度胃肠安(250,500,1 000,2 000 mg·L-1)作用体外培养的人胃癌细胞MKN45细胞,共孵育24,48,72 h,检测细胞增殖活力的改变;采用吖啶橙(AO)染色和单丹磺胺戊二胺(MDC)染色观察胃肠安对胃癌MKN45细胞自噬小体及自噬囊泡的变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测微管相关蛋白1轻链3(LC3),酵母ATG6同源物(Beclin1),泛素结合蛋白-1(p62),自噬相关基因5(ATG5),自噬相关基因7(ATG7) mRNA和蛋白的表达.结果:CCK-8实验显示,与空白组比较,胃肠安(500,1000,2 000 mg·L-1)可明显抑制MKN45细胞的增殖能力(P ＜0.05,P＜0.01);AO和MDC染色显示,与空白组比较,随着胃肠安浓度的增加,自噬小体和自噬囊泡含量逐渐增加;Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,胃肠安(1 000 mg·L-1)组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,Beclin1,ATG5,ATG7 mRNA和蛋白表达升高(P＜0.05),p62表达下降(P ＜0.05,P＜0.01).结论:胃肠安可诱导人胃癌MKN45细胞自噬,其机制涉及上调自噬相关基因Beclin1,ATG5,ATG7 mRNA和蛋白表达,下调p62 mRNA和蛋白表达,促进自噬标志蛋白LC3-I向LC3-Ⅱ转化.