摘要:
目的 探讨miR-129-2靶向调节SOX4表达对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响及其对子宫内膜癌的早期诊断价值.方法 将miR-129-2 mimics及miR-129-2 mimics NC基因序列分别转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞内,分别为miR-129-2 mimics高表达组、miR-129-2 mimics阴性对照组,并设置非转染子宫内膜癌Ishikawa细胞为空白对照组.使用甲基化敏感性特异性聚合酶链反应(MSRE-qPCR)测定子宫内膜癌Ishikawa细胞和子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中miR-129-2基因的甲基化水平,采用荧光定量PCR法测定患者癌组织及匹配癌旁组织miR-129-2基因的mRNA表达水平.并通过MTT法检测各组细胞的增殖能力,通过蛋白印迹法检测SOX4蛋白表达,采用裸鼠体内移植瘤形成实验对细胞的增殖能力进行检测.结果 Ishikawa细胞系中miR-129-2启动子区甲基化强度为74.47%.本研究中所选取的66例子宫内膜癌组织中38例存在miR-129-2启动子区高甲基化(占57.58%),且癌旁组织内无甲基化.高表达组的Ishikawa细胞中SOX4蛋白表达量显著低于阴性对照组和空白对照组(t值分别为2.436、3.786,均P<0.05),阴性对照组则显著低于空白对照组(t=2.897,P<0.05).miR-129-2在子宫内膜癌组织中的表达显著低于正常子宫内膜组织(t=6.020,P=0.000).3组Ishikawa细胞培养24h、48h、72h、96h和120h细胞增殖能力比较均有显著性差异(F值分别为4.663、3.089、5.955、6.719、8.510,均P<0.05),其中miR-129-2高表达组细胞增殖能力最低.进一步每两组之间比较显示miR-129-2高表达组在48h、72h、96h、120h时间点细胞增殖能力均显著低于阴性对照组和空白对照组(t值为2.356~10.987,均P<0.05),而阴性对照组和空白对照组比较差异均无统计学意义(t值为0.980~1.235,均P>0.05).3组裸鼠瘤体湿重、终体积、肿瘤相对体积比较均有显著性差异(F值分别为8.256、17.854、14.771,均P<0.05),其中miR-129-2上述指标最低.进一步每两组之间比较显示miR-129-2高表达组瘤体湿重、终体积、肿瘤相对体积均显著低于阴性对照组和空白对照组(t值为3.124~19.446,均P<0.05),而阴性对照组和空白对照组比较差异均无统计学意义(t值为0.884~1.459,均P>0.05).miR-129-2对子宫内膜癌具有较高的诊断价值,AUC为0.768,理论阈值点为0.002,对应的敏感度和特异度分别为0.772、0.745.结论 miR-129-2在子宫内膜癌组织和细胞系内均存在明显甲基化,因基因启动子区miR-129-2在子宫内膜癌组织中表达降低,miR-129-2可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,促进凋亡,其作用可能与靶向下调SOX4基因表达相关.