微RNA-146a通过Toll样受体信号途径在RAW264.7细胞痛风性关节炎模型炎症反应中的研究

• 作者: 何欣 张全波 朱丹 柳涛红 青玉凤 黄玉琴
• 来源期刊: 中华风湿病学杂志
• 关键词: 微RNAs 关节炎，痛风性 RAW264.7 炎症 白细胞介素-1β
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 522-529
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn141217-20200420-00163

摘要

目的:探讨微RNA（miR）-146a参与原发性痛风性关节炎发生的可能机制。方法:①培养RAW264.7细胞，给予单钠尿酸盐（MSU）晶体刺激建立痛风炎症模型，经200 μm/ml的MSU晶体刺激后，分别在0、3、6、12 h时间点收集细胞及上清液，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR，TaqMan探针法）检测miR-146a，RT-qPCR检测：白细胞介素-1受体相关激酶（IRAK）1、肿瘤坏死因子受体相关因子（TRAF）6、NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA，ELISA检测培养上清液IL-1β浓度，蛋白质印迹法检测TRAF 6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。②用Lipofectamine 2000将miR-146a模拟物（mimic）、miR-146a抑制物（inhibitor）及两者相应对照物分别转染至RAW246.7细胞，将其设置为miR-146a mimic组、miR-146a mimic对照组（mimic control）、miR-146a抑制物组、miR-146a抑制物对照组（inhibitor control），分别用200 μg/ml的MSU晶体刺激各组细胞6 h后，分别检测各组miR-146a、IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β mRNA和TRAF 6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。采用SPSS 21.0统计软件进行分析，近似正态分布定量资料以 ± s描述，组间比较采用独立样本 t检验和重复测量方差分析。 结果:① MSU晶体刺激RAW264.7细胞后，实验组在3、6、12 h miR-146a的表达水平较对照组降低（ t=-10.234，-17.059，-26.204， P均<0.01），实验组在6、12 h IL-1β蛋白浓度表达水平较对照组升高（ t=7.552，9.007， P<0.01）；分别检测2组IRAK1、TRAF 6、NF-κB、TNF-α、IL-1β mRNA的表达水平：刺激组在3、6 h IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β mRNA的表达水平较对照组升高（ t=9.847，6.147， P<0.01； t=3.49，3.32， P<0.05； t=3.643，8.471， P<0.05； t=8.726，49.68， P<0.01），实验激组在3个时间点的TNF-α mRNA的表达水平均较对照组升高（ t=4.691，11.115，12.816， P<0.01）。分别检测TRAF 6、NF-κB、IL-1β的蛋白表达水平：实验组6、12 h的TRAF6、NF-κB蛋白相对表达较对照组升高（ t=8.052，8.119， P<0.01； t=22.454，5.845， P<0.01），实验组在3个时间点IL-1β蛋白表达较对照组均升高（ t=18.561，4.74，8.432， P<0.01）。②转染后检测miR-146a mRNA表达，mimics组较mimics control组明显升高（ t=31.769， P<0.01）；inhibitor组较inhibitor control组明显降低（ t=-4.22， P<0.05）。③ miR-146a mimic组经200 μg/ml MSU晶体刺激6 h后，mimic组IRAK1、TRAF6、NF-κB、IL-1β mRNA的表达水平较mimic control组均降低（ t=-14.754，-21.201，-19.381，-17.323， P<0.01），TRAF6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平较mimic control组也降低（ t=-3.137，-32.974，-18.789， P<0.05），inhibitor组结果正好相反。 结论:①过表达miR-146a可降低IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β表达，抑制MSU晶体介导的炎症，而抑制miR-146a表达可使炎症加重，提示miR-146a参与负反馈调节痛风炎症。② miR-146a可能靶向NF-κB信号通路参与了痛风性关节炎的自发性缓解。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	青玉凤	川北医学院附属医院	103	385	9.0	14.0
2	张全波	川北医学院附属医院	32	106	5.0	9.0
3	黄玉琴	川北医学院附属医院	5	0	0.0	0.0
4	何欣	川北医学院附属医院	5	0	0.0	0.0
5	朱丹	川北医学院附属医院	9	21	3.0	4.0
6	柳涛红	川北医学院附属医院	3	2	1.0	1.0