蜂胶对细菌脂多糖刺激下奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接蛋白的影响

• 作者: 吴黎明 彭文君 李江红 欧爱群 王凯
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 中国蜂胶 抗炎 紧密连接 奶牛乳腺上皮细胞
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 临床兽医
• 页码范围: 1149-1157
• 页数: 9页
• 分类号: S857.26|S896.6
• 字数: 5614字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.05.026

摘要

本试验旨在研究中国蜂胶乙醇提取物(ethanol extract of Chinese propolis,EECP)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接渗透性的影响.EECP中总酚酸和总黄酮含量测定采用福林酚法和硝酸铝法,并建立LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,MAC-T)炎症模型,采用CCK-8法测定EECP对MAC-T相对增殖率的影响,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)评估EECP对LPS诱导的MAC-T细胞炎症相关因子(IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β)相对mRNA转录水平;以及对紧密连接蛋白(occludin、ZO-1)相对mRNA转录水平进行检测,并进一步利用免疫荧光技术对紧密连接膜蛋白进行定位,确定EECP对LPS诱导MAC-T细胞炎症紧密连接渗透性的影响.结果 显示:EECP中总酚酸含量为106.35 mg没食子酸当量(GAE)·g-1、总黄酮含量为320.85 mg芦丁当量(RE)·g-1;CCK-8结果显示EECP的安全浓度为0～15 μg·mL-1,并可有效提高LPS刺激下MAC-T的活力;LPS刺激显著增加了细胞炎症相关因子IL-6、IL-8、TN F-α和IL-1β mRNA的转录量(P＜0.001);但2.5～15.0 μg·mL-1EECP预处理显著降低了IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β mRNA的转录量;与此类似,LPS刺激显著抑制了紧密连接蛋白基因(occludin、ZO-1)mRNA的转录量(P＜0.01),而EECP预处理后紧密连接蛋白基因(occludin和ZO-1)mRNA的转录量显著增加(P＜0.05);免疫荧光染色试验也证实EECP能通过上调紧密连接蛋白(occludin、ZO-1)的表达,缓解LPS诱导的乳腺上皮细胞屏障功能紊乱.该结果证实,EECP对细菌脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症具有良好的保护作用,这为利用中国蜂胶预防奶牛乳腺炎提供了试验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭文君	中国农业科学院蜜蜂研究所	76	901	19.0	26.0
2	吴黎明	中国农业科学院蜜蜂研究所	69	416	10.0	17.0
3	王凯	中国农业科学院蜜蜂研究所	42	160	6.0	11.0