摘要:
目的 探究骨髓间充质干细胞源性外泌体(BMSC-Exo)对髓核细胞凋亡的影响及其机制.方法 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),提取BMSC-Exo.分离培养髓核细胞,先取部分细胞分为内毒素组、内毒素+二硫氨基甲酸肽吡咯烷(PDTC)组,分别加入内毒素500μg/mL、内毒素500μg/mL+PDTC 5μmol/L孵育24 h.流式细胞仪检测细胞凋亡率.另取细胞分为对照组、退变组、外泌体组、佛波醇酯组,分别采用基础培养基,内毒素500μg/mL刺激,内毒素和外泌体20μg刺激,内毒素、外泌体和佛波醇酯50μg/mL刺激培养24 h.流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Cleaved Caspase-3、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)表达情况.结果 成功分离培养BMSCs并提取BMSC-Exo.内毒素+PDTC组细胞凋亡率[(11.55±0.86)%]较内毒素组[(28.63±2.86)%]降低(t=9.909,P=0.001).对照组凋亡率[(9.05±1.61)%]较退变组[(29.48±2.83)%]显著升高(t=-10.874,P=0.000);与退变组相比,外泌体组下降至(15.08±1.65)%,差异有统计学意义(t=7.620,P=0.002);与外泌体组相比,佛波醇酯组升高至(25.41±1.38)%,差异有统计学意义(t=-8.323,P=0.001).与对照组比较,退变组p-IκBα蛋白表达升高(t=-10.575,P=0.000),Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(t=-8.506,P=0.001);与退变组比较,外泌体组p-IκBα蛋白表达降低(t=10.052,P=0.001),Cleaved Caspase-3蛋白表达降低(t=7.419,P=0.002);与外泌体组比较,佛波醇酯组p-IκBα蛋白表达升高(t=-12.125,P=0.000),Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(t=-8.421,P=0.001).结论 BMSC-Exo可抑制内毒素诱导的髓核细胞凋亡,其作用可能是通过抑制NF-κB信号通路实现的.