牛病毒性腹泻病毒Erns多表位蛋白的设计及验证

• 作者: 何延华 何金科 杨亚军 池营 肖陈城 邓肖玉 陈创夫
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 Erns蛋白 生物信息学分析 密码子优化 原核表达
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 36-43
• 页数: 8页
• 分类号: S851.33|S852.65+3
• 字数: 5207字
• 语种: 中文

摘要

利用生物信息学方法分析牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns蛋白,筛选出优势B淋巴细胞(简称B细胞)和T淋巴细胞(简称T细胞)表位组装成多表位蛋白,并在大肠埃希菌中进行表达和验证.首先从NCBI GenBank数据库获得Erns蛋白的氨基酸序列,将所得到的序列进行理化性质、跨膜结构域、亚细胞定位、磷酸化、酰基化位点分析,预测二级结构及二硫键的位置,使用4种B细胞和2种T细胞软件预测其抗原表位,将预测的表位进行筛选并组装成多表位疫苗,进行密码子优化确保其在大肠埃希菌中高效表达,最后进行蛋白的纯化和Western blot验证.结果显示,Erns蛋白由227个氨基酸残基组成,分子质量约为26 ku,理论等电点8.62,化学式为C1131 H 1768 N326 O 335 S14,不稳定系数为29.98,亲水性平均值(GRAVY)和脂肪指数分别-0.529和71.37,在大肠埃希菌体内半衰期大于10 h,不具有跨膜结构域,主要定位在细胞质中,有21个翻译后修饰(PTM)位点;在Erns蛋白的二级结构中,α螺旋占约36.12％,β折叠占约18.06％,β转角占约7.93％,无规卷曲占约37.89％,而且具有4个二硫键.将筛选出的5个B细胞和6个T细胞优势表位用柔性linker组装成多表位疫苗,Western blot结果显示多表位蛋白对BVDV阳性血清具有良好的反应原性,为牛病毒性腹泻病毒Erns多表位蛋白后续的研究奠定了基础.