甲胎蛋白抑制顺铂诱导肝癌细胞凋亡的分子机制

• 作者: 张传宝 张超 李刚 赵海建 闫颖
• 来源期刊: 中华消化杂志
• 关键词: 甲胎蛋白 肝细胞癌 增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 400-406
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn311367-20191104-00479

摘要

目的 探讨甲胎蛋白抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的分子机制.方法 选用HepG2(甲胎蛋白阳性)和QSG-7701(甲胎蛋白阴性)两种常见肝癌细胞系.分别在HepG2细胞中转染甲胎蛋白干扰质粒和在QSG-7701细胞中转染甲胎蛋白过表达质粒,培养12、24、36和48 h后,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖情况;在HepG2和QSG-7701细胞中分别干扰和过表达甲胎蛋白24 h后,加入凋亡诱导剂顺铂,采用流式细胞术检测甲胎蛋白对顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的影响;采用蛋白质免疫共沉淀技术(CoIP)检测甲胎蛋白与转录因子维甲酸受体(RAR)的相互作用;运用染色质免疫共沉淀技术(ChIP)实验联合蛋白质印迹法验证甲胎蛋白表达水平对DNA损伤诱导转录基因1(DDIT1)表达的影响,以及甲胎蛋白和DDIT1对肝癌细胞凋亡的影响.统计学方法采用t检验.结果 CCK-8结果显示,质粒转染12、24、36和48 h后,过表达甲胎蛋白的QSG-7701细胞相对增殖率分别较对照组升高28.7％±2.7％、49.8％±6.1％、65.8％±3.0％和79.3％±2.0％,而敲减甲胎蛋白后的HepG2细胞相对增殖率分别较对照组降低16.5％±6.1％、28.5％±5.7％、42.5％±1.7％和57.6％±3.8％,差异均有统计学意义(t=3.978、4.357、3.461、3.636、2.858、2.446、3.233、4.492,P均＜0.05).流式细胞术结果显示,QSG-7701细胞过表达甲胎蛋白24和48 h后的细胞凋亡率较单独顺铂处理细胞24和48 h后分别降低46.3％±2.9％和47.7％±7.4％,HepG2细胞敲减甲胎蛋白24和48 h后的细胞凋亡率较单独顺铂处理细胞24和48 h后分别升高86.7％±4.0％和31.6％±10.5％,差异均有统计学意义(t=3.543、3.893、2.336、2.561,P均＜0.05).CoIP实验结果显示,AFP与RAR能够发生相互作用.在HepG2细胞中敲减甲胎蛋白表达后,提取核蛋白发现RAR的入核较对照组增加;而在QSG-7701细胞中过表达甲胎蛋白后,RAR的入核较对照组减少.ChIP实验结果显示,AFP能够调控DDIT1表达.敲减甲胎蛋白的HepG2细胞中DDIT1表达量高于对照组,而过表达甲胎蛋白的QSG-7701细胞中DDIT1表达量低于对照组.转染DDIT1后,HepG2和QSG-7701细胞凋亡率分别较对照组上升53.1％±4.0％和73.3％±6.4％,差异均有统计学意义(t=3.462、3.012,P=0.009、0.017).在QSG-7701细胞中,过表达甲胎蛋白后细胞凋亡率较单独加入顺铂下降46.6％±4.8％,过表达甲胎蛋白+顺铂+过表达DDIT1后细胞凋亡率较过表达甲胎蛋白+顺铂上升43.6％±2.7％,差异均有统计学意义(t=2.833、2.545,P=0.018、0.029).在HepG2细胞中,敲减甲胎蛋白后的细胞凋亡率较单独加入顺铂上升73.3％±6.1％,敲减甲胎蛋白+顺铂+敲减DDIT1后的细胞凋亡率较敲减甲胎蛋白+顺铂下降32.7％±3.7％,差异均有统计学意义(t =2.497、2.773,P=0.032、0.020).结论 甲胎蛋白能够通过与转录因子RAR相互作用,抑制其下游基因DDIT1表达,不仅促进肝癌细胞增殖,还可增强肝癌细胞的抗凋亡能力,削弱顺铂对肝癌细胞的促凋亡作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李刚	北京大学医学部基础医学院生物化学与生物物理系	79	300	9.0	14.0
2	赵海建	北京医院国家老年医学中心国家卫生健康委临床检验中心中国医学科学院老年医学研究院	17	133	7.0	11.0
3	张超	北京医院国家老年医学中心国家卫生健康委临床检验中心中国医学科学院老年医学研究院	1	0	0.0	0.0
4	闫颖	北京医院国家老年医学中心国家卫生健康委临床检验中心中国医学科学院老年医学研究院	3	2	1.0	1.0