左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR及mEPSC的影响

• 作者: 凌佳 刘检 向韵 吴梦瑶 孟盼 张秀丽 王宇红 赵洪庆 雷昌
• 来源期刊: 湖南中医药大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 糖尿病并发抑郁症 海马神经元 突触可塑性 膜片钳 N-甲基-D-天冬氨酸受体 兴奋性突触后电流 左归降糖解郁方
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 方药研究
• 页码范围: 274-279
• 页数: 6页
• 分类号: R285.5
• 字数: 4614字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-070X.2020.03.006

摘要

目的 探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)症状态下胎鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体(n-methyl-d-aspartic acid receptor,NR)和微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic current,mEPSC)频率及幅度的干预作用.方法 取胎鼠(16～18 d)的海马,进行分离纯化和培养,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色法鉴定.随机把海马原代神经元分6组:空白组、模型组、空白血清组、MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组.根据分组,于空白组加10％的培养液;其他5组加15 mmol/L的高糖和50μmol/L的皮质酮予以造模;造模后,空白血清组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组中分别加10％的空白血清、二甲双胍+氟西汀含药血清、左归降糖解郁方含药血清,MK-801组中加10 μmol/L的MK-801,同时干预18 h.蛋白NR2A、NR2B的表达运用高内涵细胞成像技术(high content analysis,HCA)检测;海马神经元细胞的mEPSC采用全细胞膜片钳技术来记录,并对比不同组间神经元细胞的mEPSC频率和电流幅度.结果 经镜下观察及NSE鉴定,所培养的细胞是海马神经元细胞,阳性率在95％以上.经HCA检测,空白组细胞的胞体明显,形态完整,突触之间形成丰富的神经网络.与空白组比,模型组和空白血清组的海马神经元细胞出现萎缩、突触断裂或神经网络消失,蛋白NR2A、NR2B的荧光值增强(P＜0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组细胞突触间的连接恢复,蛋白NR2A、NR2B荧光值减弱(P＜0.01或P＜0.05).膜片钳结果显示,对比空白组,模型组、空白血清组的mEPSC频率和幅度上升(P＜0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方组的mEPSC频率和幅度下降(P＜0.01).结论 左归降糖解郁方抗DD大鼠海马神经元细胞受损的保护作用机制,可能在于其能够调控DD状态下的海马神经元蛋白NR2A、NR2B的表达及突触可塑性功能.