miR-135a-5p通过Smad4基因调控多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞的增殖及凋亡

• 作者: 吴日然 杜静 林秀峰 柯玩娜 高子轩
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-135a-5p Smad4 多囊卵巢综合征 卵巢颗粒细胞 增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 892-897,911
• 页数: 7页
• 分类号: R711.75
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)通过调控SMAD家庭成员4(Smad4)表达而调控多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞的增殖及凋亡.方法 体外培养人卵巢颗粒细胞KGN与人正常卵巢上皮细胞IOSE80,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-135a-5p、Smad4的表达量;分别用anti-miR-con、anti-miR-135a-5p、anti-miR-135 a-5p与si-con、anti-miR-135a-5p与si-Smad4转染至卵巢颗粒细胞;甲基噻唑基四唑法(MTT)检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测过表达miR-135a-5p对野生型和突变型Smad4荧光素酶活性的影响;Western blot检测细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、细胞周期依赖蛋白激酶2(CDK2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量.结果 与正常卵巢上皮细胞IOSE80比较,KGN细胞中miR-135a-5p的表达水平显著升高,Smad4 mRNA及蛋白表达量显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与anti-miR-con组比较,anti-miR-135a-5p组细胞活力显著降低,克隆形成数显著减少,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、CDK2、Bcl-2蛋白水平显著降低,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).双荧光素酶报告实验证实miR-135a-5p能够抑制Smad4的3'-UTR区荧光素酶活性;与anti-miR-135a-5p+si-con组比较,anti-miR-135a-5p+si-Smad4组细胞活力显著升高,克隆形成数显著增多,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1、CDK2、Bcl-2蛋白水平显著升高,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低,差异均有统计学意义(P,＜0.05).结论 干扰miR-135a-5p可能通过靶向调控Smad4的表达从而抑制卵巢颗粒细胞增殖及促进细胞凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴日然	中山市博爱医院生殖中心	17	81	5.0	8.0
2	林秀峰	中山市博爱医院生殖中心	15	60	4.0	7.0
3	高子轩	中山市博爱医院妇科	5	12	2.0	3.0
4	柯玩娜	中山市博爱医院生殖中心	12	26	3.0	4.0
5	杜静	中山市博爱医院生殖中心	13	71	4.0	8.0