百草枯诱导多巴胺能神经元α-突触核蛋白的自噬性降解障碍机制

• 作者: 武坷鑫 王一帆 田甜 闫伟广 黄敏
• 来源期刊: 中华劳动卫生职业病杂志
• 关键词: 百草枯 SH-SY5Y细胞 自噬 α-突触核蛋白
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 180-186
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn121094-20190924-00543

摘要

目的 探讨百草枯(PQ)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)自噬水平的影响及诱导α-突触核蛋白(α-syn)异常聚集的机制.方法 以SH-SY5Y细胞作为多巴胺能神经元的体外模型,不同浓度PQ(0、18.75、37.5、75、150、300、600 μmol/L)处理细胞24 h,150 μmol/L PQ处理细胞不同时间(0、12、24、36、48、60、72、96 h),每组设5个复孔.CCK8法检测细胞相对存活率,确定剂量/时间-效应关系;不同浓度PQ(0、75、150、300、600 μmol/L)处理细胞24h,150 μmol/L PQ处理细胞不同时间,检测细胞LDH活力;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞内自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)、自噬相关蛋白(Beclin1)、Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-激酶(Vps34)、泛素结合蛋白(p62)及α-syn表达水平;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测α-syn基因表达水平;免疫荧光法(Immunofluorescencetechnique,IF)检测α-syn表达水平;用自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)100 nmol/L预处理细胞6h,Western blot检测处理前后细胞内自噬相关蛋白及α-syn的蛋白表达水平.结果 PQ染毒细胞24h后,细胞相对存活率明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组比较,PQ呈剂量依赖性和时间依赖性抑制SH-SY5Y细胞的增殖活性(P＜0.05);与正常对照组比较,染毒组细胞上清中LDH活力明显升高(P＜0.05);Western blot结果显示,与正常对照组比较,染毒组细胞内自噬相关蛋白比值(LC3II/LC3I)、Beclin1和Vps34蛋白表达水平明显下降(P＜0.05),p62蛋白表达水平升高(P＜0.05);细胞内α-syn蛋白和基因表达水平均明显升高(P＜0.05);IF结果显示,经PQ处理后,细胞内α-syn荧光信号明显聚集于胞质,荧光强度增强(P＜0.05);Western blot结果显示,与染毒组比较,RAPA干预组的LC3II/LC3I、Beclin1和Vps34蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),α-syn蛋白表达水平明显下降(P＜0.05).结论 PQ可能通过诱导SH-SY5Y细胞自噬功能障碍,引起细胞内α-syn的异常聚集.