松叶猪毛菜瞬时转化体系的建立及初步验证

• 作者: 夏春兰 李亚楠 闻志彬
• 来源期刊: 干旱区研究
• 关键词: 松叶猪毛菜(Salsola laricifolia) 瞬时转化 农杆菌侵染法 SaNADP-ME1
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 植物与植物生理
• 页码范围: 1317-1326
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13866/j.azr.2020.05.25

摘要

松叶猪毛菜(Salsola laricifolia)是典型的荒漠C3-C4中间型植物,隶属于藜科(Chenopodiaceae)猪毛菜属,是研究C4途径进化以及光呼吸减少机制的最佳物种.以松叶猪毛菜无菌苗为试验材料,通过农杆菌介导的瞬时转化方法,分别对质粒载体、苗龄、农杆菌侵染浓度、侵染时间和乙酰丁香酮浓度进行研究,探究各因素对松叶猪毛菜植株瞬时遗传转化效率的影响,以确立最佳的瞬时转化体系;并在上述体系的基础上,过表达松叶猪毛菜叶绿体型NADP-苹果酸酶基因(SaNADP-ME1),通过GUS组织化学染色和荧光定量PCR验证瞬时转化效果.结果表明:(1)采用pCAMBIA1301构建表达载体,以30d苗龄植株作为转化受体,在侵染液中添加200μmol·L-1乙酰丁香酮,农杆菌菌液OD600为0.8,侵染6h条件下,瞬时转化效率最佳(92％);(2)构建过表达载体并瞬时转化松叶猪毛菜植株,通过染色检测到GUS活性,并且荧光定量PCR检测到SaNADP-ME1的表达量相比对照组显著增高,该基因成功瞬时过表达转化至植株中.综上所述,本试验在松叶猪毛菜植株中建立了一种快速基因功能验证方法,为以后研究松叶猪毛菜功能基因奠定了基础.