miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株PIK3R1基因靶向调控作用的研究

• 作者: 张鲁青 柯孔亮 楼婷婷 王金秋 缪淳迪 郭宇
• 来源期刊: 浙江医学
• 关键词: 结直肠癌 逆转录 靶基因 生物学特性
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 650-655,659
• 页数: 7页
• 字数: 5912字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12056/j.issn.1006-2785.2020.42.7.2019-2406

摘要

目的 探讨miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株磷脂酰肌醇三激酶调节亚单位α(PIK3R1)基因靶向调控的作用.方法 培养HT-29细胞并用脂质体转染试剂进行转染,利用实时定量逆转录-聚合酶链反应、免疫印迹试验分别检测miRNA-455-5p上下调后PIK3R1及PI3K/AKT信号通路的PI3K下游效应分子(AKT1、MTOR)的基因及蛋白相对表达量.构建PIK3R1的3′非编码区(3′UTR)报告载体,利用双荧光素酶报告基因实验验证PIK3R1基因是否为miRNA-455-5p靶基因.结果 与模拟剂对照组比较,上调miRNA-455-5p能抑制HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTOR mRNA及蛋白的表达(均P<0.05);与抑制剂对照组比较,抑制miRNA-455-5p能促进HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTOR mRNA及蛋白的表达(均P<0.05).双荧光素酶报告基因实验可获得测序验证正确的PIK3R1的3′UTR报告载体.hsa-miRNA-455-5p与psicheck3-gluc-_PIK3R1-3′UTR-WT_-fluc共转染293细胞48h后检测得到的分泌型荧光素酶/非分泌型荧光素酶(Gluc/Fluc)值较mimics-N与psicheck3-gluc-_PIK3R1-3′UTR-WT_-fluc共转染48h后得到的值明显降低(P<0.05).结论 miRNA- 455- 5p对人结肠癌HT- 29细胞株PIK3R1基因存在负向调控作用,PIK3R1基因是miRNA- 455- 5p调控的靶基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭宇	宁波市第一医院甲乳外科	25	65	5.0	7.0
2	王金秋	宁波市第一医院甲乳外科	4	0	0.0	0.0
3	柯孔亮	宁波市杭州湾医院肛肠外科	1	0	0.0	0.0
4	楼婷婷	宁波市杭州湾医院乳腺外科	1	0	0.0	0.0
5	张鲁青	宁波市杭州湾医院肛肠外科	1	0	0.0	0.0
6	缪淳迪	宁波市杭州湾医院肛肠外科	1	0	0.0	0.0