检测水痘-带状疱疹病毒糖蛋白水平双抗体夹心ELISA法的建立和验证

• 作者: 姜春来 张春 朱琨莹 杨阳 潘东 衣延明 袁若森 郑柏松 郭世杰 陈晓旭
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白 双抗体夹心 酶联免疫吸附试验 变异系数
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 1315-1323
• 页数: 9页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671⁃587x.20200633

摘要

目的:建立可快速检测水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白抗原水平的双抗体夹心ELISA法,并验证其特异性、线性、准确性和精密性.方法:采用抗VZV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测VZV糖蛋白抗原水平.优化抗体组合、抗体工作浓度、包被条件、封闭条件、酶标抗体反应条件和显色条件,并对建立的方法进行特异性、线性、准确性及精密性验证.结果:捕获抗体VZV-mAb-03和酶标抗体VZV-mAb-HRP-02的组合为最优双抗组合,其最适浓度分别为450.0和0.1μg·L-1,最适包被条件为0.05 mol·L-1 Tris-HCl(pH值为8.7±0.1)在4℃条件下包被过夜(18 h),最适封闭条件为1％牛血清白蛋白(BSA)在37℃条件下封闭2 h,最适样品稀释液为磷酸盐吐温缓冲液(PBST),抗原夹心与酶标抗体最适反应条件均为37℃、1 h,最适显色条件为37℃、15 min.经验证,该方法与其他人用疫苗及辅料成分无交叉反应;线性范围为500～2600 PFU·mL-1,回归系数(R2)>0.95;批内回收率82.2％～115.7％,变异系数(CV)<10.2％;批间回收率80.5％～118.6％,板内CV<17.4％,板间CV<14.9％.结论:建立了一种基于检测双抗体夹心的VZV糖蛋白抗原水平的ELISA检测方法,符合定量检测需要,可用于VZV疫苗的研发和生产过程中的抗原水平检测.