降钙素原单克隆抗体的制备及鉴定应用

• 作者: 孙丽君 孙晶莹 季延红 封青 李亚萍 李研
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 医学
• 关键词: 降钙素原(PCT) 原核表达 单克隆抗体 单抗鉴定
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 755-759
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 3437字
• 语种: 中文

摘要

目的 表达和纯化降钙素原(PCT)基因的融合蛋白,制备PCT融合蛋白的鼠源性单克隆抗体.方法 根据GenBank数据库中降钙素原氨基酸序列设计引物,从TT细胞中扩增出降钙素原的全长片段,将其克隆至pEASY-E1原核表达载体,构建重组表达质粒pEASY-E1-PCT;利用大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞转化阳性克隆质粒中,以IPTG作为诱导剂诱导表达融合蛋白,通过His镍离子亲和层析纯化目的蛋白,纯化的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,获取单克隆抗体并纯化,ELISA法检测抗体效价及交叉鉴定,制备的单抗与市售的降钙素原检测试剂盒进行对比.结果 成功构建了pEASY-E1-PCT原核表达载体,获得2株可以稳定分泌特的单抗,经鉴定这两株抗体效价高、特异性好,与市售检测试剂盒检测结果一致.结论 成功构建了原核表达载体pEASY-E1-PCT,获得了高纯度降钙素原PCT蛋白,制备并获得了2株特异的单克隆抗体,制备单抗与商品试剂盒对血清样本检测结果基本一致,为进一步研究降钙素原的生物学功能及试剂盒开发提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	封青	陕西省人民医院中心实验室	5	11	2.0	3.0
2	季延红	西安交通大学医学部基础医学院病原生物学与免疫学系	8	13	2.0	3.0
3	孙晶莹	西安交通大学医学部基础医学院病原生物学与免疫学系	15	8	2.0	2.0
5	孙丽君	陕西省人民医院中心实验室	6	1	1.0	1.0
8	李研	陕西省人民医院中心实验室	3	2	1.0	1.0
9	李亚萍	陕西省人民医院中心实验室	1	0	0.0	0.0