不同浓度米诺环素对人胶质瘤细胞增殖、自噬、凋亡的影响及其机制

• 作者: 严婉约 刘丽 李巧巧 李科 赵海龙 韩利民
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 米诺环素 神经胶质瘤 细胞增殖 细胞凋亡 自噬 AMP活化蛋白激酶类 沉默信息调节因子2相关酶1
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 801-806,后插1
• 页数: 7页
• 分类号: R739.41
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20200238

摘要

目的 探讨不同浓度米诺环素对人类胶质瘤U87和LN229细胞增殖及凋亡的影响和作用机制.方法 (1)U87和LN229细胞设对照组(DMSO处理),5μmol/L米诺环素组和10μmol/L米诺环素组,分组处理72 h后采用MTT法检测细胞增殖水平,免疫荧光标记检测细胞自噬蛋白微管相关蛋白l轻链3B亚基(LC3B)表达水平,Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达变化.(2)构建沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)-shRNA载体,观察敲低SIRT1表达后,不同浓度米诺环素对U87和LN229细胞自噬的影响.结果 (1)与对照组相比,5μmol/L和10μmol/L米诺环素组细胞增殖能力下降,免疫荧光标记显示胞浆内自噬标记蛋白LC3B的表达增多,Western blot结果显示哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)水平显著降低,自噬基因相关蛋白5(Atg5)、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α亚基(p-AMPKα)、SIRT1水平显著增加(P<0.05).与对照组相比,10μmol/L米诺环素组B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70s6k)水平显著降低,活化形式的Caspase-3(Cleaved caspase-3)水平显著增加(P<0.05),而5μmol/L米诺环素组除Cleaved Caspase-3表达水平下降外其他凋亡相关蛋白水平未见显著变化(P>0.05).(2)敲低SIRT1表达后,shSIRT1组mTOR和LC3B表达水平较对照组明显下降;而经过米诺环素处理后,mTOR的表达出现明显升高,而LC3B表达水平仅部分恢复.结论 5、10μmol/L的米诺环素均能有效抑制人类胶质瘤U87和LN229细胞的生长,其机制可能与AMPK/SIRT1通路诱导细胞自噬和p70s6k/Bcl-2通路诱导细胞凋亡有关.