大鼠胰岛beta细胞截短型P糖蛋白表达的初步鉴定

• 作者: 李代清 杨蔚 申翔
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: P糖蛋白 截短型P糖蛋白 abcb1b基因
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1355-1359
• 页数: 5页
• 分类号: R587
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2020.12.013

摘要

目的 初步探究大鼠胰岛beta细胞截短型P糖蛋白(mini-P糖蛋白,65 kD)表达的存在.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测雄性Wistar大鼠胰岛、肝脏和INS-1细胞中P糖蛋白主要调控基因abcb1b N端、C端及abcb1a的表达情况.提取INS-1细胞的总RNA,设计abcb1b基因3'末端和5'末端引物,逆转录合成对应的cDNA,PCR产物经过地高辛-dUTP标记,获得Northern blot检测探针.提取大鼠胰岛总RNA,通过甲醛变性电泳分离RNA并转至尼龙膜,将探针与尼龙膜上RNA进行杂交,检测abcb1b基因的选择性剪切.提取INS-1细胞蛋白,分为蛋白酶抑制剂组(加入蛋白酶抑制剂)和无蛋白酶抑制剂组,利用Western blot技术检测截短型P糖蛋白的表达差异.结果 实时荧光定量PCR结果 显示大鼠胰岛、INS-1细胞及肝的abcb1b表达量远大于abcb1a,差异具有统计学意义(P<0.05).大鼠胰岛、INS-1细胞的abcb1b C端拷贝数大于N端(约1.7倍),差异具有统计学意义(P<0.05).Northern blot杂交结果 为单条带,分子量与全长P糖蛋白符合,未检测到abcb1b基因选择性剪切条带.Western blot结果 显示无蛋白酶抑制剂组仅有65 kD截短型P糖蛋白的表达,而蛋白酶抑制剂组主要表达分子量为170 kD的全长P糖蛋白,截短型P糖蛋白表达显著减低,与无蛋白酶抑制剂组相比,截短型P糖蛋白的表达差异具有统计学意义(P<0.05).结论 初步认为在大鼠胰岛beta细胞探测到的截短型P糖蛋白可能为蛋白降解产物,并非abcb1b基因选择性剪切的结果 .