右美托咪定通过miR-760/HDGF信号通路影响胶质瘤细胞的恶性生物学行为

• 作者: 丁容 付强 康文越 林慧 邢丹丹
• 来源期刊: 海南医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 右美托咪定 miR-760 HDGF 胶质瘤 增殖 迁移 侵袭 凋亡
• 年，卷（期）: 2020,（20）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1537-1544
• 页数: 8页
• 分类号: R739.4|R614
• 语种: 中文
• DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20200409.009

摘要

目的:探讨右美托咪定对胶质瘤细胞的恶性生物学行为的影响及其机制.方法:体外培养人脑胶质瘤细胞A172,用不同浓度(50、100、200、400、800 mg/L)的右美托咪定处理.采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测右美托咪定对A172细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测右美托咪定对A172细胞凋亡能力的影响;Transwell小室实验检测右美托咪定对A172细胞迁移及侵袭能力的影响.实时定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测右美托咪定对微小RNA-760(miR-760)、肝癌衍生生长因子(HDGF)表达的影响;双荧光素酶报告实验检测miR-760过表达对野生型和突变型HDGF荧光素酶活性的影响;A172细胞中转染miR-760 mimics及miR-con,检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的变化.Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、细胞凋亡的标志蛋白PARP降解产物(Cleaved PARP)蛋白表达.结果:右美托咪定可明显降低胶质瘤细胞存活率(P<0.05),减少迁移细胞数与侵袭细胞数(P<0.05),抑制HDGF、MMP-2、MMP-9的表达(P<0.05),而提高细胞凋亡率(P<0.05),促进miR-760、Cleaved caspase-3、Cleaved PARP的表达(P<0.05),浓度达到800 mg/L时作用明显;荧光素酶报告基因结果证实miR-760能够抑制HDGF的3′-UTR区荧光素酶活性(P<0.05);转染miR-760 mimics后,与miR-con组比较,细胞存活率明显降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数明显减少(P<0.05),MMP-2、MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05),而细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Cleaved caspase-3、Cleaved PARP的表达水平明显升高(P<0.05);干扰miR-760的表达可逆转右美托咪定对胶质瘤细胞生物学行为的影响.结论:右美托咪定通过miR-760/HDGF信号通路减弱胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡.