牛卵泡颗粒细胞CART相互作用蛋白鉴定及受体筛选

• 作者: 侯淑宁 成俊丽 朱芷葳 李鹏飞 许冬梅 郝庆玲
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛 卵泡 可卡因-苯丙胺调节转录肽 G蛋白偶联受体 质谱分析
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 3046-3056
• 页数: 11页
• 分类号: S823.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.12.014

摘要

旨在筛选牛卵泡发育关键负调控因子可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine and amphetamine regulated tran-script peptide,CART)的相互作用蛋白及其受体.本研究采集3头健康母牛双侧卵巢,分离卵泡后刮取颗粒细胞(granulosa cells,GCs)混样;采用跨膜蛋白Extraction试剂盒提取膜蛋白,运用Protein G琼脂糖磁珠与重组CART蛋白、Anti-CART抗体共孵育(n=3);洗脱CART-蛋白复合物进行二级质谱(LC-MS/MS)分析;获得的蛋白经可信度过滤,利用生物信息学技术对其进行功能聚类分析,通过CELLO V2.5软件对蛋白进行亚细胞定位和跨膜区分析;获得7次跨膜的G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs),经ProtScale软件分析其胞内外结构区段特点,符合神经肽与受体结合结构特点的GPCR作为CART的候选受体.抽提的膜蛋白经免疫亲和层析(n=3)后,分别鉴定出149、557和298个相互作用蛋白,经筛选剔除重复蛋白,共鉴定出620个蛋白.多数据库集功能富集分析表明,CART相互作用蛋白包含参与信号传导活性的GNAS、GNG8和JUP,参与类固醇生物合成的HSD3B,参与细胞凋亡或增殖调节的OPA1和S100A11,参与Notch信号通路的ERH,这些蛋白或信号通路均与牛卵泡发育密切相关.亚细胞定位和跨膜区分析共获得膜蛋白156个,占总蛋白数的20.53％;其中7次跨膜的GPCRs有8个.经TMHMM分析表明,8个GPCRs中仅ZMPSTE24、HM13和GPR108的N端在胞外,C端在胞内,与神经肽受体的结构特征一致;经PredictProtein结合位点分析表明,ZMPSTE24在5～6跨膜区间的胞内环存在G蛋白结合的位点.ZMPSTE24作为CART的候选受体,有待于分子互作和功能试验进一步加以验证.本研究为牛卵泡CART受体的鉴定奠定了基础,对丰富牛卵泡发育调控理论具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许冬梅		26	102	4.0	9.0
2	朱芷葳		54	223	7.0	13.0
3	李鹏飞		65	175	7.0	9.0
4	侯淑宁		5	4	2.0	2.0
5	郝庆玲		10	11	2.0	2.0
6	成俊丽		2	0	0.0	0.0