禽致病性大肠杆菌cOmpT单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定

• 作者: 刘娟华 刘秀梵 喻婷 杨梓纯 樊毛迪 王娅玲 薛菲 许炎辉 高崧
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽致病性大肠杆菌 cOmpT 单克隆抗体 抗原表位
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 3122-3132
• 页数: 11页
• 分类号: S852.612
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.12.021

摘要

旨在制备禽致病性大肠杆菌(APEC)染色体编码外膜蛋白(cOmpT)的特异性单克隆抗体,本研究利用实验室已构建的APEC cOmpT重组表达质粒pET-28a-comp T,经IPTG诱导表达后,获得以包涵体形式存在的约36 ku的重组蛋白cOmpT,利用尿素浓度梯度透析复性获得纯化蛋白cOmpT,并以此免疫BALB/c小鼠.建立间接ELISA检测方法,最适抗原包被浓度为0.625μg·mL-1,最适血清稀释度为1:6400.4次免疫后取小鼠脾进行细胞融合,采用有限稀释法多轮筛选后得到3株能稳定分泌针对cOmpT蛋白的单克隆抗体,分别命名为1G8、2C3和2G3,均为IgG2b亚类.3株杂交瘤细胞上清ELISA抗体效价分别为1:200、1:3200和1:3200.Western blot结果显示,3株单抗均能与cOmpT发生特异性反应,而不与其他受检菌发生交叉反应.运用原核表达系统对compT基因进行截短表达,对单克隆抗体针对的cOmpT抗原表位进行鉴定,结果显示单抗1G8、2C3和2G3识别的抗原表位分别是83DQDWMDS89、90SNPGTW95和197TFKYSGW203.本研究成功制备了3株抗cOmpT蛋白的单克隆抗体,并对其识别的抗原表位进行了鉴定,为cOmpT蛋白功能研究和APEC新型表位疫苗研发奠定了基础.