基于Calpain-ERK信号通路研究Calpeptin对雌激素诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影响Δ

• 作者: 何艳 宛蕾 张艳 沈敬堃 王旭东 董宇华 詹云惠 金爱
• 来源期刊: 中国药房
• 学科: 医学
• 关键词: Calpeptin 雌二醇 人乳腺上皮细胞MCF-10A 细胞转化 干性标志物 细胞外信号调节激酶 机制
• 年，卷（期）: 2020,（13）
• 所属期刊栏目: 药学研究
• 页码范围: 1549-1556
• 页数: 8页
• 分类号: R737.9|R34
• 字数: 6986字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.13.03

摘要

目的:研究钙激活中性蛋白酶(Calpain)抑制剂Calpeptin对雌二醇(E2)诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影响,并探讨其作用机制.方法:以人乳腺上皮细胞MCF-10A为研究对象,采用E2诱导制备转化细胞模型.将细胞分为对照组[0.1％二甲基亚砜(DMSO)]、E2转化组(50 nmol/L)、E2转化+Calpeptin组(50 nmol/L E2+1μmol/L Calpeptin),以相应含药培养基连续培养15代.然后采用MTT法检测细胞的增殖率(24、48 h),采用平板克隆试验检测细胞的克隆形成率,采用悬浮成球试验检测细胞的成球数;采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测细胞中干性标志物(CD44、Nanog、OCT4)和细胞外信号调节激酶(ERK)mRNA表达水平,并采用Western blotting法检测细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平.另取E2转化细胞分为对照组(0.1％DMSO)和U0126(ERK抑制剂)组(10μmol/L),按上述方法测定细胞的克隆形成率、成球数以及细胞中CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平,以验证ERK表达抑制与转化细胞生物学行为及干性标志物表达之间的关系.结果:与对照组比较,E2转化组细胞的增殖率(24、48 h)、克隆形成率均显著升高(P<0.01),细胞成球数均显著增加(P<0.01),细胞中CD44、Nanog、OCT4、p-ERK mRNA表达水平及CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平均显著升高(P<0.01).与E2转化组比较,E2转化+Calpeptin组细胞的增殖率(24、48 h)、克隆形成率均显著降低(P<0.01),细胞成球数显著减少(P<0.05),细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK mRNA表达水平及CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01).加入ERK抑制剂U0126后,E2转化细胞的克隆形成率、成球数以及细胞中p-ERK、CD44、Nanog、OCT4蛋白表达水平均显著增加或升高(P<0.05或P<0.01).结论:Calpeptin可抑制E2诱导的人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达,其机制可能与抑制Calpain-ERK信号通路的激活有关.