lncRNA MIAT在巨噬细胞炎症反应中的作用

• 作者: 杨堃 温大蔚 王吉波 王子叶 赵磊
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 长链非编码RNA心肌梗死转录本 巨噬细胞 炎症 细胞外调节蛋白激酶5
• 年，卷（期）: 2020,（16）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 1921-1924,1930
• 页数: 5页
• 分类号: R392.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2020.16.001

摘要

目的:探索长链非编码RNA心肌梗死转录本(lncRNA MIAT)在巨噬细胞炎症反应中的作用及其可能参与的炎症通路.方法:脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞J774A.1制备炎症反应细胞模型(LPS组),以等体积PBS刺激的J774A.1细胞为PBS对照组(PBS组),实时定量PCR (RT-qPCR)及ELISA法检测两组IL-1β、TNF-α的mRNA及蛋白表达水平,RT-qPCR检测lncRNA MIAT在两组的表达量及亚细胞定位;shRNA敲低lncRNA MIAT,分为shMIAT敲低(KD)组、shNC阴性对照(NC)组,RT-qPCR检测lncRNA MIAT敲低效率及两组IL-1β、TNF-α mRNA相对表达量;Western blot检测KD、NC组的NF-κB、ERK5等多种转录因子磷酸化水平;在LPS刺激J774A.1细胞分别加入ERK5特异性抑制剂(ERK5-IN-2)、ERK5-IN-2溶解液二甲基亚砜(DMSO),分为抑制剂组、DMSO对照组,Western blot检测ERK5磷酸化水平,RT-qPCR检测两组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量.结果:LPS组IL-1β、TNF-α mRNA相对表达水平及蛋白表达水平均高于PBS组(P＜0.05);lncRNA MIAT 在LPS组相对表达量显著高于PBS组,且主要表达于细胞核;lncRNA MIAT在KD组显著低于NC组,其在J774A.1细胞的敲低效率为43％.KD组IL-1β、TNF-α mRNA相对表达量显著高于NC组;KD组ERK5磷酸化程度显著高于NC组,而NF-κB、STAT3、ERK1/2磷酸化水平差异无统计学意义;抑制剂组EKR5磷酸化显著低于DMSO对照组,且抑制剂组的IL-1β、TNF-α mRNA相对表达水平显著低于DMSO对照组.结论:lncRNA MIAT可能通过抑制ERK5磷酸化减少IL-1β、TNF-α合成,从而抑制巨噬细胞炎症反应.