HBV阿德福韦酯耐药位点基因突变检测方法的建立

• 作者: 何吕芬 利振坤 李欢 李沙 王身华
• 来源期刊: 中华医院感染学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Taqman-LNA荧光PCR 乙型肝炎病毒感染 阿德福韦酯 基因突变
• 年，卷（期）: 2020,（20）
• 所属期刊栏目: 肝脏感染相关疾病防治研究
• 页码范围: 3041-3046
• 页数: 6页
• 分类号: R512.6+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11816/cn.ni.2020-192698

摘要

目的 探究并评价Taqman锁核酸(Locked nucleic acid,LNA)探针实时荧光聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)在检测乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染患者阿德福韦酯(Adefovir dipivoxil,ADV)耐药位点基因突变中的应用价值.方法 通过基因测序筛选阳性样本,进而构建ADV重组质粒标准品、标准曲线等,以构建的重组质粒为标准品建立实时荧光定量PCR反应体系,评价其线性范围、扩增效率、灵敏度及重复性等指标.结果 rtA181V、rtN236T位点野生型和突变型重组质粒被成功构建;Taqman-LNA荧光PCR检测的线性范围为1×109/μl～1×102/μl;rtA181V、rtN236T位点野生型及突变型质粒标准品的扩增效率均高于75;rtA181V位点可稳定准确检测到最低为0.04％的突变比例,rtN236T位点可稳定准确检测出最低为0.05％的突变比例,则Taqman-LNA荧光PCR检测rtA181V和rtN236T位点临床标本的灵敏度分别为0.04％和0.05％;rtA181V、rtN236T位点野生型及突变型质粒标准品在高、中浓度中的变异系数均<5％.结论 T a q-man-LNA荧光PCR检测法线性范围广、扩增效率高、灵敏度高、重复性好,是一种快速、简便、灵敏的基因突变检测方法,在检测HBV感染患者ADV耐药位点基因突变中具有较高的应用价值和临床意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李欢		8	12	2.0	3.0
2	李沙		4	0	0.0	0.0
3	利振坤		1	0	0.0	0.0
4	何吕芬		1	0	0.0	0.0
5	王身华		1	0	0.0	0.0