AAT基因转化杂交构树叶片组培筛选研究

• 作者: 谢晓阳 魏磊 王伟 景炳年 陈谭星 颜慧萍 曹力凡 常霞 高正龙
• 来源期刊: 西部林业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 杂交构树 载体构建 组织培养 AAT基因 遗传转化
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 页码范围: 27-34
• 页数: 8页
• 分类号: S722.3|S792
• 语种: 中文
• DOI: 10.16473/j.cnki.xblykx1972.2021.01.004

摘要

为了提高杂交构树的组培效率,以蒺藜苜蓿为研究对象,进行生物信息分析,克隆蒺藜苜蓿目的基因AAT,构建表达载体,通过农杆菌转化方法将目的载体转入杂交构树组培叶片中,优化组培相关体系配比,抗生素筛选配比,RT-PCR和定量PCR检验重组植株.结果表明:最佳灭菌体系为75％乙醇消毒20 s,0.3％HgCl2消毒15 min,污染率低,成活率高;最佳愈伤期激素配比为6-BA 2.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L,最佳壮苗期激素配比为6-BA 1.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L.最佳筛选抗生素配比为噻孢霉素(Cef)300 mg/L、潮霉素(Hyg)7.5 mg/L;通过RT-PCR验证试验结果,并通过定量PCR测定AAT基因表达含量,重组植株与野生型相比提高2.5倍.试验首次建立了重组载体遗传转化杂交构树,对叶片组培及筛选方法具有重要意义.