基于FLUOstar平台的小麦dsDNA荧光定量与基因型分析

• 作者: 肖永贵 Susanne DREISIGACKER Claudia NUÑEZ-RÍOS 胡卫国 夏先春 何中虎
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 普通小麦 dsDNA 荧光定量 显性标记 分子育种
• 年，卷（期）: 2022,（7）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 947-953
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2017.00947

摘要

双链DNA(dsDNA)定量分析是植物分子生物学研究的基础，对基因型分析尤为重要。本研究以λ噬菌体dsDNA为标准样品，建立了荧光定量标准曲线，探讨荧光核酸定量通量性及其与紫外法定量的差异，并分析荧光染料在基因分型中的应用。结果表明，荧光染料能够对dsDNA进行高效微量定量分析(<1.1ngL-1)，但因鉴定核酸的浓度较低，对小麦籽粒和叶片全基因组DNA定量时稀释倍数较大，易增大浓度误差。降低反应体系量导致标准曲线决定系数降低，影响测量准确性。精确定量dsDNA浓度时，总反应体系应大于200L;对PCR产物进行基因分型时，总反应体系应不低于40L。相同DNA模板浓度下，FLUOstar平台可以对抗秆锈病基因显性标记csSr32#1(Sr32)和IB-267(Sr50)的PCR产物进行基因型分型，判断准确率为100%。对特异性强且等位基因片段差异大(≥100bp)的共显性标记，如抗叶锈病基因标记We173(Yr26)等，用荧光染料同样可以进行基因分型。与琼脂糖凝胶电泳相比，荧光染料鉴定等位基因价格略高，但方法简单、准确快速、重现性好，可用于分子育种中世代材料快速筛选。