一种用于检测1型糖尿病的抗原蛋白质表达及鉴定方法的临床应用

• 作者: 袁晓燕 宋宇 曲业敏 李武 袁锦云 丛海燕 鞠毅 姚继承 王明义
• 来源期刊: 实用检验医师杂志
• 关键词: 1型糖尿病 谷氨酸脱羧酶65 化学发光检测系统
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 论著|Original Articles
• 页码范围: 46-48
• 页数: 3页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7151.2021.01.015

摘要

目的 表达并鉴定一种用于检测1型糖尿病的抗原蛋白质,探讨其在化学发光检测系统中的临床应用.方法 利用Primer 5.0软件设计引物,扩增谷氨酸脱羧酶65(GAD65)的部分蛋白质编码区(CDS)并克隆至pFastBac1载体中,经测序验证后在SF9细胞中表达.采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定所得蛋白.利用该蛋白制备一种用于1型糖尿病检测的试剂盒,将其运用于化学发光检测系统,计算阳性检出率,并比较化学发光检测系统与蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)阳性检出率的差异.结果 成功表达了与GAD65抗体特异结合的抗原蛋白质,SDS-PAGE显示其相对分子质量为65000,与预测值相符;亲和层析纯化后蛋白纯度≥95％.所制备的化学发光检测试剂盒的阳性检出率明显高于Western blotting〔78.95％(30/38)比52.63％(20/38),P<0.05〕.结论 GAD65抗体特异结合抗原蛋白纯度高、特异性强,利用该蛋白制备的相应试剂盒可应用于化学发光检测系统,提高了GAD65抗体的阳性检出率和对1型糖尿病的诊断效率,避免传统检测方法的漏检,值得在临床推广.