lncRNA GAS5对胰岛素抵抗模型中卵巢颗粒细胞功能的影响及相关机制研究

• 作者: 刘琴 袁蕾
• 来源期刊: 中华细胞与干细胞杂志（电子版）
• 关键词: 多囊卵巢综合征 lncRNA GAS5 胰岛素抵抗 卵巢颗粒细胞
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 论著|Original Researches
• 页码范围: 137-145
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2021.03.002

摘要

目的 探究lncRNA GAS5在多囊卵巢综合征(PCOS)中的表达及其对胰岛素抵抗(IR)模型中卵巢颗粒细胞功能的影响及其相关机制.方法 收集PCOS包含伴IR者(n=20)与不伴IR者(n=20)及非PCOS患者(n=20)的卵巢颗粒细胞.RT-PCR检测患者颗粒细胞中lncRNA GAS5的表达;应用脂质体稳定转染技术将过表达lncRNA GAS5质粒转染入大鼠卵巢颗粒细胞中,采用地塞米松及胰岛素联合诱导方法建立大鼠颗粒细胞的IR模型;己糖激酶及比色法检测模型中葡萄糖及乳酸的消耗量进行鉴定;将大鼠颗粒细胞分为4组,对照组(正常培养无任何特殊处理的颗粒细胞);IR组(胰岛素抵抗条件下的颗粒细胞);IR-pcDNA3.1-NC组(对转染pcDNA3.1-NC后的颗粒细胞进行IR造模处理);IR-pcDNA3.1-GAS5组(对转染pcDNA3.1-GAS5后的颗粒细胞进行IR造模处理).应用MTT、Annexin V-FITC、流式细胞术及ELISA实验分别检测过表达lncRNA GAS5对IR条件下颗粒细胞的增殖、凋亡、细胞周期和炎症因子TNF-α、IL-6、IL-18表达的影响;Western blot检测过表达lncRNA GAS5对IR条件下颗粒细胞中磷脂酰肌醇-3(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路p-PI3K、p-AKT及细胞周期蛋白Cyclin B1、CDK1和凋亡相关蛋白Bcl-2、cleaved caspase-3表达的影响.采用重复测量方差分析、独立样本t检验和单因素方差分析比较组间的指标水平差异.结果 与对照组比较,IR组和IR-pcDNA3.1-NC组颗粒细胞中lncRNA GAS5的表达(1.09±0.17比0.41±0.11、0.38±0.06)降低,而IR-pcDNA3.1-GAS5组lncRNA GAS5表达水平(1.09±0.17比3.10±0.33)升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与IR组比较,IR-pcDNA3.1-GAS5组颗粒细胞增殖能力(52.16±8.83比68.39±11.14)及细胞周期阻滞(G1期:69.05±10.09比43.51±6.09,S期:25.37±5.59比9.44±2.29,G2/M期:7.11±2.81比47.02±6.69)均升高,细胞凋亡率(33.26﹪ ±3.44﹪比16.01﹪±2.56﹪),促炎因子TNF-α(138.56±27.05比105.30±12.64)、IL-6(123.69±10.08比86.11±8.03)、IL-18的表达水平(41.72±5.61比28.29±8.17)均降低,差异具有统计学意义(P均<0.05).Western blot检测结果显示,与IR组比较,IR-pcDNA3.1-GAS5组颗粒细胞中p-PI3K/PI3K(0.79±0.06比0.51±0.02)、p-AKT/AKT(0.83±0.03比0.47±0.01)、cleaved caspase-3(0.81±0.03比0.39±0.07)均降低,而Cyclin B1(0.09±0.03比0.55±0.06)、CDK1(0.12±0.05比0.53±0.08)和Bcl-2(0.09±0.02比0.21±0.02)均升高,差异具有统计学意义(P均<0.05).结论 伴有IR的PCOS患者卵巢颗粒细胞中lncRNA GAS5表达显著降低,而过表达颗粒细胞中lncRNA GAS5能够促进IR条件下的细胞增殖和细胞周期进展,并降低其凋亡发生率,抑制颗粒细胞对促炎因子TNF-α、IL-6和IL-18的表达.LncRNA GAS5可能通过PI3K/AKT信号通路发挥上述作用,以保护IR条件下的颗粒细胞功能损伤.