旋毛虫与人骨肉瘤细胞MG-63相关抗原基因TCTP的原核表达与鉴定

• 作者: 岳涛涛 张楠 鹿香云 张洪波 王晓岑 宫鹏涛 李建华 李新 张西臣
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 关键词: 旋毛虫 骨肉瘤相关抗原 TCTP 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 论著|ORIGINAL ARTICLES
• 页码范围: 270-273,281
• 页数: 5页
• 分类号: R383.15
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.210306

摘要

目的 对旋毛虫(Trichinella spiralis)与人骨肉瘤细胞MG-63相关抗原基因TCTP进行原核表达,对表达产物进行鉴定及反应原性分析.方法 利用抗MG-63细胞全蛋白抗血清筛选旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库得到旋毛虫TCTP基因.PCR扩增TCTP基因,连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒pET-32a(+)-TCTP,转化入感受态细胞BL21(DE3)后用IPTG诱导表达,利用His标签镍离子蛋白纯化柱对表达产物进行纯化,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白的表达及反应原性.结果 经酶切鉴定和测序鉴定,重组质粒pET-32a(+)-TCTP构建正确.SDS-PAGE检测重组蛋白TCTP在原核表达系统中主要以可溶性形式表达,融合蛋白的相对分子质量约为43×103.Wetern blot检测重组蛋白TCTP可被抗MG-63细胞多抗血清识别.结论 成功构建了重组质粒pET-32a(+)-TCTP,表达的重组蛋白TCTP具有反应原性,为该蛋白生物学功能的研究奠定了基础.