弓形虫HAD2b基因缺失株的构建及生物学功能研究

• 作者: 张海生 梁勤立 李婷婷 朱兴全 王金磊
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 弓形虫 RH△HAD2b CRISPR-Cas9 生物学功能
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 562-568
• 页数: 7页
• 分类号: S852.729
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0088

摘要

弓形虫是一种很成功的专性细胞内寄生的机会性致病原虫,可感染几乎所有温血动物,导致的弓形虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病,目前尚无有效的疫苗.为了研究弓形虫卤代酸脱卤酶(haloacid dehalogenase,HAD)家族中一个保守蛋白HAD2b的功能,本研究通过利用CRISPR/Cas9技术成功构建了弓形虫Ⅰ型RH虫株HAD2b基因缺失株(RH△HAD2b).通过噬斑试验分析发现,RH△HAD2b形成的噬斑大小和数量与野生株相比无显著差异.通过逸出试验发现,大部分RH△HAD2b和野生株在钙离子的刺激下,在2 min内完成逸出,差异不显著.小鼠毒力试验发现,昆明鼠分别感染RH△HAD2b和野生株后均在7～10d内死亡,无显著差异.对HAD2b基因转录组数据库现有数据分析表明,HAD2b在弓形虫RH株的表达量显著低于其它虫株,说明HAD2b在不同虫株可能发挥不同的功能.本研究成功构建了弓形虫HAD2b基因缺失株(RH△HAD2b),为进一步研究HAD2b基因在Ⅰ型虫株的其它生物学功能奠定了基础,也为构建弓形虫其它基因型虫株的HAD2b基因缺失株奠定了技术基础.